[发明专利]一种用于SEB超灵敏检测的光子晶体传感材料及其制备方法和超灵敏检测SEB的方法

权利要求书

1.一种用于SEB超灵敏检测的光子晶体传感材料的制备方法，包括以下步骤：

(1)在无水乙醇和氨水的存在下，将原硅酸四乙基酯进行水解反应，去除所述无水乙醇和剩余氨水，离心筛分粒径，制得硅球；

(2)在无水乙醇的存在下，将所述硅球与3-氨丙基三乙氧基硅烷混合，超声、充氮除氧后，进行搅拌反应，制得氨基化硅球；

(3)将所述氨基化硅球的水溶液与纳米金溶液进行接触反应，获得修饰纳米金颗粒的氨基化硅球SiO₂-AuNPs；

(4)将所述修饰纳米金颗粒的氨基化硅球SiO₂-AuNPs充分混匀，配制为SiO₂-AuNPs微球悬浮液，置于恒温干燥箱中干燥、进行堆垒，制得光子晶体；

(5)将5'端修饰有巯基的SEB适配体在金属浴中加热，然后在室温下放置，然后加入PBS缓冲液将SEB适配体稀释为适配体稀释液，将所述适配体溶液加入步骤(4)所得的SiO₂-AuNPs光子晶体中，在恒温培养箱中孵育，得到SEB适配体-光子晶体传感材料。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(1)中，所述原硅酸四乙基酯与氨水和无水乙醇的体积比为0.6-1.0：1：10-20，所述水解反应的温度为20-40℃，反应时间为6-12h。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(2)中，所述硅球与3-氨丙基三乙氧基硅烷的体积比为2-10：1，所述搅拌反应的温度为60-80℃，反应时间为1-10h。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(3)中，所述氨基化硅球与纳米金溶液的体积比为0.5-2：1，所述接触反应的温度为20-28℃，反应时间为1-10h。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(4)中，所述SiO₂-AuNPs微球悬浮液的浓度为0.5-1.5％；所述干燥的的温度为50-70℃，时间为20-28小时。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(5)中，SEB适配体的序列如SEQ ID NO：1所示且5’端修饰有巯基，

5’-SH-TTTTTTTTTTGGTATTGAGGGTCGCATCCACTGGTCGTTGTTGTCTGTTGTCTGTTATGTTGTTTCGTGATGGCTCTAACTCTCCTCT-3’(SEQ ID NO：1)；

金属浴加热的温度为90-98℃，金属浴加热的时间为2-10分钟；在室温下放置的时间为0.8-1.2小时；孵育的温度为36-38℃，时间为20-28小时。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(5)中，孵育结束后，使用PBS缓冲液洗涤以除去未结合在光子晶体上的适配体。

8.由权利要求1-7中任意一项所述的制备方法制得的用于SEB超灵敏检测的光子晶体传感材料。

9.一种超灵敏检测SEB的方法，包括以下步骤：

(1)将权利要求8所述的光子晶体传感材料浸泡在PBS缓冲液中，把光纤光谱仪的探头垂直固定在光子晶体上方并浸入液面下，获得光子晶体的反射光谱图；

(2)待体系稳定后，依次加入不同浓度的SEB，使体系的SEB浓度成为0.01fg/mL～1μg/mL，分别记录稳定后的反射峰；

(3)以SEB浓度的对数为横坐标，反射峰强度的变化量为纵坐标，建立工作曲线；

(4)将待测样品加入到光子晶体传感体系中，待体系稳定后，记录反射峰的变化，根据变化量，通过工作曲线计算出SEB的含量。

10.根据权利要求9所述的超灵敏检测SEB的方法，所述待测样品为牛奶样品，该方法还包括对待测样品的预处理步骤：以6000-8000rpm离心10-30分钟以除去脂肪，用PBS缓冲液稀释400-600倍。