[发明专利]镁铁层状双氢氧化物纳米材料在小鼠胚胎干细胞传代培养和冻存中的应用有效
| 申请号： | 202010929755.5 | 申请日： | 2020-09-07 |
| 公开（公告）号： | CN111979182B | 公开（公告）日： | 2023-08-15 |
| 发明（设计）人： | 朱融融;程黎明;贺晓烈 | 申请（专利权）人： | 上海市同济医院 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735;A01N1/02 |
| 代理公司： | 上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙) 31262 | 代理人： | 周春洪 |
| 地址： | 200065 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 层状 氢氧化物 纳米 材料 小鼠 胚胎 干细胞 传代 培养 中的 应用 | ||
1.一种用于小鼠胚胎干细胞传代培养的培养基，其特征在于，所述培养基为含有镁铁层状双氢氧化物纳米材料的高糖型DMEM培养基，所述培养基100 mL规格的配方为：高糖DMEM、15 mL的胎牛血清、2 mM的谷氨酰胺、0.1 mM的非必需氨基酸、1 mM的丙酮酸钠、0.1mM的β-巯基乙醇、20 μg/mL的镁铁LDH纳米材料；所述镁铁层状双氢氧化物纳米材料由以下方法制成：配制1.538 g的Mg(NO3)2·6H2O和0.606 g的Fe(NO3)3•9H2O的金属盐混合溶液共20 mL，水作为溶剂；配制0.016 mol的氢氧化钠溶液；N2氛围下，混合金属盐混合溶液和氢氧化钠溶液，剧烈搅拌30分钟；搅拌完成后将溶液转移到水热釜中，过夜水热反应；取出溶液于离心管，使用高速离心机9000 rpm离心15分钟后得到沉淀，继续洗涤沉淀三次后保存得到镁铁LDH纳米材料。
2.一种小鼠胚胎干细胞冻存液，其特征在于，所述小鼠胚胎干细胞冻存液的配方为：0.1 mL的DMSO、0.9 mL的含有LIF的完全培养液和镁铁LDH纳米材料；所述含有LIF的完全培养液100 mL规格的配方为：高糖DMEM、15 mL的胎牛血清、2 mM的谷氨酰胺、0.1 mM的非必需氨基酸、1 mM的丙酮酸钠、0.1 mM的β-巯基乙醇、1000 units/mL的白血病抑制因子LIF；所述镁铁LDH纳米材料的添加方法为：添加镁铁LDH纳米材料的水溶液5 μL，使得其在冻存液中的终浓度为20 μg/mL；所述镁铁LDH纳米材料由权利要求1中的方法制备而成。
3.一种小鼠胚胎干细胞冻存方法，其特征在于，使用权利要求2所述的小鼠胚胎干细胞冻存液进行冻存。
4.镁铁层状双氢氧化物纳米材料在小鼠胚胎干细胞传代培养或冻存中的应用，其特征在于，所述的镁铁层状双氢氧化物纳米材料由以下方法制成：配制1.538 g的Mg(NO3)2·6H2O和0.606 g的Fe(NO3)3•9H2O的金属盐混合溶液共20 mL，水作为溶剂，配制0.016 mol的氢氧化钠溶液；N2氛围下，混合金属盐混合溶液和氢氧化钠溶液，剧烈搅拌30分钟；搅拌完成后将溶液转移到水热釜中，过夜水热反应；取出溶液于离心管，使用高速离心机9000 rpm离心15分钟后得到沉淀，继续洗涤沉淀三次后保存得到镁铁LDH纳米材料。
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