[发明专利]一种基于生物素-链霉亲和素放大的糖化血红蛋白试剂盒及其制备方法

说明书

一种基于生物素‑链霉亲和素放大的糖化血红蛋白试剂盒，涉及生物医学诊断技术领域，基于现有的糖化血红蛋白试剂盒抗冻融性能差的问题提出的。试剂盒包括试剂R1和试剂R2，试剂R1包括甘氨酸缓冲液、胶乳微球、表面活性剂、盐、稳定剂、防腐剂和抗冻融剂；试剂R2包括MES缓冲液、盐、稳定剂、生物素、链霉亲和素、HbA1c单克隆抗体和防腐剂。本发明还公开了一种基于生物素‑链霉亲和素放大的糖化血红蛋白试剂盒的制备方法。本发明相比现有技术的优点在于：本发明的试剂盒R1中含有无任何修饰的聚苯乙烯微球，能够快速吸附血液中糖化血红蛋白，试剂中添加了抗冻融剂，能够提高试剂盒的抗冻融稳定性，添加抗冻融剂后反复冻融R1测试值明显趋于稳定。

技术领域

本发明涉及医学及生物化学技术领域，尤其涉及一种基于生物素-链霉亲和素放大的糖化血红蛋白试剂盒及其制备方法。

背景技术

据国际糖尿病联盟(InternationaleDiabetesFederation，IDF)统计，2019年全球糖尿病患者约有4.63亿人，其中中国糖尿病患者人数排名第一，约为1.164亿人。研究发现糖化血红蛋白(HbA1c)是糖尿病患者疾病控制程度的一项良好指标，它反映的是患者在检测前120天内的平均血糖水平。HbA1c作为血糖控制的金标准，所有糖尿病患者，无论用什么方法反应血糖的变化，最终都要以HbA1c的变化作为最终评价一种药物或一个治疗方案的有效检测指标。因此，HbA1c检测的临床意义非常重要。

目前HbA1c的检测方法主要包括色谱法、免疫法和电泳法。其中色谱法包括高效液相阳离子交换色谱法和高效液相硼酸亲和色谱法等。作为HbA1c检测的金标准，高效液相阳离子交换色谱法一向是临床上最具应用价值、最精确的方法。然而，在用液相离子交换色谱法测定HbA1c的研究时，样本(例如全血样本、全血稀释样本、全血冻干样本等)保存后再进行HbA1c检测时，测定值会随着样本的保存时间的推移而变动。

专利CN101595230A的发明专利公开了一种HbA1c测定方法，同时也指出了含Hb试样保存后再进行HbA1c检测时，将得到比使用刚采集的含Hb试样的测定值低的值。该专利采用在样本中加入抑制剂的方法来避免因保存样本而引起的HbA1c测定值的变动，但是，该方法需要测量者的直接参与，使测量过程复杂化，从而大大降低了检测效率。专利CN107991500A公开了一种糖化血红蛋白检测试剂盒，该试剂盒包含试剂R1和试剂R2，试剂R1包含胶乳、缓冲液A和表面活性剂；试剂R2包含抗体、缓冲液B和表面活性剂。该试剂盒可以消除个体血红蛋白含量差异在糖化血红蛋白检测中的影响，而且稳定性好，便于使用和保存。上述技术存在的问题如下：抗冻融性能差、灵敏度低、线性范围差。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种抗冻融性能好、线性范围广的糖化血红蛋白浓度的基于生物素-链霉亲和素放大的糖化血红蛋白试剂盒。

本发明是通过以下技术方案实现的，一种基于生物素-链霉亲和素放大的糖化血红蛋白试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2，包括的成分及相应含量为：

试剂R1：

试剂R2：

本发明的试剂盒R1中含有无任何修饰的聚苯乙烯微球，能够快速吸附血液中糖化血红蛋白，试剂中添加了抗冻融剂，能够提高试剂盒的抗冻融稳定性，添加抗冻融剂后反复冻融R1测试值明显趋于稳定；采用双试剂，操作简单，灵敏度高，线性范围广R²＝0.9898，可以广泛应用于各种透射或者散射分析仪，包括普通生化分析仪、特定蛋白分析仪等。

优选地，所述甘氨酸缓冲液的pH＝8.0。

优选地，所述MES缓冲液的pH＝7.5。