[发明专利]一种促进星孢菌素积累的方法

说明书

本发明提供了一种促进星孢菌素积累的方法，具体公开了一种促进星孢菌素积累的培养基，通过采用不同的维生素组合和培养基配方，极大地促进了星孢菌素的积累，同时通过补加碳源，使发酵产量最高可以提高40％以上。本发明提供的技术方案简单易行，进一步提高了星孢菌素的生产效率，降低生产成本，易于星孢菌素的工业化生产应用。

技术领域

本发明涉及工业微生物发酵技术领域，具体涉及一种促进星孢菌素积累的方法。

背景技术

星孢菌素(Staurosporine)是1977年从链霉菌streptomyces staurosporeus中分离出来的吲哚类生物碱，具有抗细菌、抗真菌、降血压、抑制血小板凝聚及保护神经等多种生物活性，特别是staurosporine还是一种广谱的激酶抑制剂，具有开发成抗肿瘤药物的潜力。然而，科学家随后又发现它的激酶抑制活性的特异性很差(能与迄今发现的90％的人类激酶发生作用)，由此产生的毒副作用限制了其成药的可能性。为此，药物学家合成了大量的衍生物，希望能够改善此类化合物激酶特异性抑制的问题。其中，staurosporine半合成产物米哚妥林(midostaurin,PKC412)由于具备良好的激酶抑制选择性脱颖而出。2017年4月28日，FDA批准midostaurin(商品名为Rydapt)与化疗疗法联合用于新确诊的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)成年患者治疗，适用于有特定基因突变FLT3的患者。另外，除AML之外，Rydapt也被批准用于患有某些类型罕见血液障碍的成年患者的治疗，包括侵袭性系统性肥大细胞增生症(ASM)、伴有血液肿瘤的系统性肥大细胞增生症(SM-AHN)和肥大细胞白血病(MCL)。

米哚妥林是25年来AML首款新药，通过Clarivate Analytics数据库查询，至2019年9月30号，midostaurin的全球销售额已经达到1.9亿美元，星孢菌素作为其前体原料，市场前景非常广阔。因此，近年来staurosporine作为其原料而备受关注。目前，专利CN108048369A和CN107603922A公开了产星孢菌素链霉菌发酵获得星孢菌素的方法，但生产菌株都属于海洋链霉菌属，工艺中需要添加海水，且专利CN107603922A工艺中还需使用大孔树脂，最高产量为320mg/L，实际工业化应用较差。

为了克服星孢菌素发酵技术中菌种性状不稳定、产量低，难以实现工业化生产等缺点，我公司选育出一株全新的星孢菌素产生菌，具体公开在CN108676757A，该菌株具备生产能力高、遗产稳定性高、发酵产量提升明显等优势，但其公开的发酵方法仍然存在发酵产量不够高、发酵成本大等问题，不利于大规模工业化生产。

发明内容

本发明提供了一种促进星孢菌素积累的方法，该方法采用链霉菌(streptomycessp.)HS-HY-153为生产菌株，该菌株在基础发酵培养基中，通过添加维生素组合物，进行有氧发酵的步骤，所述的维生素组合物为烟酸和盐酸硫胺。

作为优选，所述基础发酵培养基包括可同化的碳源、可同化的氮源以及无机盐。

优选的实施方案中，上述可同化的碳源选自葡萄糖、麦芽糊精、甘油、蔗糖、可溶性淀粉、玉米淀粉之一或上述任何两种或多种物质的组合，优选为甘油和葡萄糖的组合。

优选的实施方案中，上述碳源中葡萄糖加入量为0-10g/L，优选为3-5g/L，更优选为5g/L。

优选的实施方案中，上述可同化的氮源选自酵母粉、花生饼粉、黄豆饼粉、大豆粉、鱼粉、麸质粉之一或上述任何两种或多种物质的组合，优选为花生饼粉和酵母粉的组合。

优选的实施方案中，所述无机盐选自硫酸锌、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸铜、硫酸锰、硫酸氢二铵、氯化钾、氯化钠、氯化镁、氯化钴、钼酸钠、柠檬酸三钠、碳酸钙、氯化钙之一或上述任何两种或多种物质的组合，优选为碳酸钙。