[发明专利]CD226基因人源化非人动物的构建方法及应用

权利要求书

1.一种CD226基因人源化改造的非人动物的构建方法，其特征在于，所述的非人动物的基因组中包含人源化CD226核苷酸序列，所述人源化CD226核苷酸序列从5’-3’顺序依次包含人CD226核苷酸序列、鼠CD226核苷酸序列和LoxP STOP序列，其中，所述人CD226核苷酸序列编码的人CD226蛋白序列如SEQ ID NO.2第1至278位所示氨基酸序列，所述鼠CD226 核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

所述的构建方法包括用所述人源化CD226核苷酸序列插入或替换至非人动物CD226基因座上，使用靶向载体或sgRNA进行非人动物的构建；

所述的靶向载体包含所述人源化CD226核苷酸序列, 所述的靶向载体还包含与待改变的转换区5’端和3’端同源的DNA片段，即5’和3’臂，所述5’臂序列如SEQ ID NO.3所示,所述3’臂序列如SEQ ID NO.4所示；

所述sgRNA靶向的靶位点序列如SEQ ID NO.8-15任一项所示。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述人CD226核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述人源化CD226蛋白如SEQ IDNO.32的氨基酸所示。

4.根据权利要求1-3任一所述的构建方法，其特征在于，所述的非人动物为大鼠或小鼠。

5.一种靶向载体，其特征在于，所述的靶向载体包含人源化CD226核苷酸序列, 所述的靶向载体还包含与待改变的转换区5’端和3’端同源的DNA片段，即5’和3’臂，所述5’臂序列如SEQ ID NO.3所示,所述3’臂序列如SEQ ID NO.4所示，所述人源化CD226核苷酸序列从5’-3’顺序依次包含人CD226核苷酸序列、鼠CD226 核苷酸序列和LoxP STOP序列，其中，所述人CD226核苷酸序列编码的人CD226蛋白序列如SEQ ID NO.2第1至278位所示氨基酸序列，所述鼠CD226 核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

6.如权利要求5所述的靶向载体，其特征在于，人CD226核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。

7.一种人源化CD226蛋白，其特征在于，所述的人源化CD226蛋白包含人CD226蛋白的胞外区、信号肽、跨膜区和胞质区，并且所述人源化CD226蛋白如SEQ ID NO.32的氨基酸序列。

8.一种编码权利要求7所述的人源化CD226蛋白的人源化CD226基因，其特征在于，所述的人源化CD226基因包含SEQ ID NO.5的核苷酸序列。

9.权利要求1-4任一构建方法构建的非人动物，权利要求7所述的人源化CD226蛋白、权利要求8所述的人源化CD226基因在CD226基因或蛋白相关研究中的应用，所述应用不是疾病的诊断和治疗方法，所述的应用包括：

A）涉及人类细胞的免疫过程的产品开发，制造或筛选人类抗体中的应用；

B）作为药理学、免疫学、微生物学和医学研究的模型系统中的应用；

C）涉及人类细胞的免疫过程的生产和利用动物实验疾病模型，用于病原学研究中的应用；

D）在体内研究人CD226信号通路调节剂的筛选、药效检测、评估疗效、验证或评价；或者，

E）研究CD226基因功能，研究人CD226抗体，研究针对人CD226靶位点的药物、药效，研究免疫相关疾病药物以及抗肿瘤药物方面的应用。