[发明专利]缓释iPSC-MSC-Exosomes温敏壳聚糖复合凝胶制备方法

权利要求书

1.缓释iPSC-MSC-Exosomes温敏壳聚糖复合凝胶制备方法，按以下步骤进行：

1)将壳聚糖盐酸盐和明胶粉末溶于水中搅拌混匀，获得的溶液中，壳聚糖盐酸盐含量及明胶含量分别为2-3g/ml与0.7-1.2g/ml；

2)在步骤1)获得的溶液中逐滴加入0.444g/ml甘油磷酸二钠盐溶液，使得溶液中的壳聚糖：明胶：甘油磷酸二钠盐的最终比等于5:1.5-2.5:7-13，即得到具有温度敏感性的壳聚糖凝胶溶液；

3)在体外通过超速离心法提取iPSC-MSC-Exosomes；

4)将iPSC-MSC-Exosomes按比例逐渐加入温敏壳聚糖溶液中，充分混合，得到具有缓释iPSC-MSC-Exosomes特性的温敏壳聚糖复合凝胶。

2.根据权利要求1所述的缓释iPSC-MSC-Exosomes温敏壳聚糖复合凝胶制备方法，其特征在于：所述步骤3)中在体外通过超速离心法提取iPSC-MSC-Exosomes的步骤是：

a)收集细胞悬液在300g离心10分钟；

b)收集a)中上清液，2000g，离心10分钟；

c)收集b)中上清液，10000g，离心30分钟；

d)收集c)中上清液，10000g，离心30分钟；

e)收集d)中上清液，超速离心100000g，70分钟；

f)收集e)中沉淀，此时的沉淀为外泌体和一些其他蛋白；

g)PBS洗一次，超速离心100000g，70分钟；此时的沉淀即为所需外泌体。

3.权利要求1所述的缓释iPSC-MSC-Exosomes温敏壳聚糖复合凝胶，应用于各类体外组织工程的构建、各类组织局部应用治疗作用，组织损伤修复机制研究。