[发明专利]一种高产2-苯乙醇的基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是由酿酒酵母AY15的单倍体菌株α5将核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的CAN1基因全部缺失得到。

2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以酿酒酵母为出发菌株，通过同源重组的方法敲除其CAN1基因得到。

3.如权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌通过如下步骤得到：

(1)以酿酒酵母的基因组为模板，PCR扩增得到CAN1基因的上、下游序列的DNA分子片段；

(2)通过醋酸锂化学转化法，将步骤(1)所述上、下游序列的DNA分子片段以及筛选标记基因转化至所述酿酒酵母中，通过同源重组得到敲除了CAN1基因的重组菌株；

(3)采用Cre-loxP重组系统敲除步骤(2)所述重组菌株中的筛选标记基因；

(4)传代培养以使步骤(3)引入的游离质粒丢失，获得酿酒酵母重组菌。

4.如权利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，所述筛选标记基因为KanMX抗性基因。

5.权利要求1-4任一项所述基因工程菌在液态发酵法生产白酒中的用途。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述液态发酵法生产白酒是以所述基因工程菌作为生产菌株，以高粱为原料，制备高粱水解液作为发酵培养基，接种所述基因工程菌，静置发酵。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述基因工程菌的接种量为5×10⁶CFU/mL，30℃静置发酵。