[发明专利]一种高效生产1,3-丙二醇的基因工程菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种高效生产1,3-丙二醇的基因工程菌，所述基因工程菌同时强化表达1,3-丙二醇氧化还原酶和甲酸脱氢酶，所述基因工程菌为重组的肺炎克雷伯氏菌，其特征在于，所述1,3-丙二醇氧化还原酶为来自大肠杆菌的1,3-丙二醇氧化还原酶同工酶，其编码基因为YqhD，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述甲酸脱氢酶为来自奥奈达希瓦式菌MR-1的甲酸脱氢酶，其编码基因为FdhD，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述基因工程菌的构建方法包括如下步骤：

（1）将载体质粒pET28a上的T7启动子替换为肺炎克雷伯氏菌中1,3-丙二醇氧化还原酶启动子dhat，构建表达载体pET28a-dhat；

（2）将大肠杆菌的1,3-丙二醇氧化还原酶同工酶基因YqhD插入pET28a-dhat，构建表达载体pET28a-dhat-YqhD；

（3）将奥奈达希瓦式菌MR-1的甲酸脱氢酶基因FdhD插入pET28a-dhat-YqhD，构建表达载体pET28a-dhat-YqhD-FdhD；

（4）将表达载体pET28a-dhat-YqhD-FdhD转化进肺炎克雷伯氏菌，挑选阳性重组子，得基因工程菌K.pneumoniae/pET28a-dhat-YqhD-FdhD。

2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌构建所用的表达载体中1,3-丙二醇氧化还原酶基因位于甲酸脱氢酶基因的上游，1,3-丙二醇氧化还原酶基因的表达采用肺炎克雷伯氏菌中1,3-丙二醇氧化还原酶启动子dhat。

3.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述1,3-丙二醇氧化还原酶的酶活是出发菌株的3.25倍，所述甲酸脱氢酶的酶活为0.45U/mg。