[发明专利]一种干细胞外泌体生产护眼液的加工方法

说明书

本发明公开了一种干细胞外泌体生产护眼液的加工方法，采用含血清培养基培养人脂肪来源间充质干细胞，得到培养上清液，且培养上清液中含有外泌体；将培养上清液进行一次离心处理后，取上清进行二次离心处理，然后取上清得到离心液；将离心液用超滤管进行超滤浓缩处理，得到超滤液；将离心后的上清液转移到离心管中，在10000g离心30min，收集到含有微囊泡的上清液，得到含有外泌体的沉淀。本发明通过采用离心的方式对上清液进行处理，而且通过多级离心方式进行加工，得到的浓缩液浓度较高，离心处理后的上清液质量更加稳定，活性较高，有效的减少外泌体的机械性损伤，更好地保留外泌体的活性，进一步的提高了该护眼液的使用质量。

技术领域

本发明涉及护眼液加工技术领域，具体为一种干细胞外泌体生产护眼液的加工方法。

背景技术

外泌体（exosome）是由细胞内的多泡体（multivesicularbody，MVB）与细胞膜融合后，释放到细胞外基质中的一种直径约30～150nm的膜性囊泡，很多细胞均能分泌外泌体，如T细胞、B细胞、树突细胞、肥大细胞和肿瘤细胞等，外泌体中包含有多种蛋白质和RNA，在细胞之间起到传通信息和相互调控的作用，而现有市场上所制造出的干细胞外泌体护眼液应用非常广泛，很好的对人体的眼部进行保护，还能避免出现酸痛和干涩，但是护眼液在加工过程中生产出的浓缩液浓度较低，离心效果较差，导致生产出的护眼液质量不稳定，活性较低，使用时会降低护眼液的保护作用，由此给护眼液的使用带来了较大的局限性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种干细胞外泌体生产护眼液的加工方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种干细胞外泌体生产护眼液的加工方法，其加工方法包括以下步骤：

S1、采用含血清培养基培养人脂肪来源间充质干细胞，得到培养上清液，且培养上清液中含有外泌体；

S2、将培养上清液进行一次离心处理后，取上清进行二次离心处理，然后取上清得到离心液；将离心液用超滤管进行超滤浓缩处理，得到超滤液；将离心后的上清液转移到离心管中，在10000g离心30min，收集到含有微囊泡的上清液，得到含有外泌体的沉淀，将超滤液进行再次离心处理，最后可得到干细胞外泌体；

S3、石菖蒲500g、黄连400g、蒲公英600g、远志1000g、熟地黄700g、大枣500g、太子参500g、川芎500g、茯神700g、连翘300g、栀子600g、黄芩500g、麦冬300g、楮实子1000g、胡萝卜素500g份、维生素200g、胶原蛋白600g按一定比例进行切碎混合，并加水进行煮沸，水蒸气蒸馏，将得到的浓缩液加水再次煮沸并过滤，将药渣去除干净；

S4、随后将浓缩液搅拌均匀，利用活性炭脱色、抽滤，向所得到的浓缩液中添加氢氧化钠，边添加边搅拌，静置24h，得到护眼液；

S5、将上述得到的干细胞外泌体与适量的护眼液依次倒入混合设备中并搅拌均匀，静置一段时间即可得到干细胞外泌体护眼液。

优选的，所述在步骤2将含血清培养基培养干细胞至细胞密度大于75%，收集干细胞，然后采用不含血清培养基对干细胞继续培养，待细胞长满平底，收集培养基。

优选的，所述在步骤2中将含有微囊泡的上清液在70000g离心80min。

优选的，所述在步骤2中离心条件为：4℃，3500～4500g离心40～60min。

优选的，所述在步骤S5中利用混合设备缓慢顺时针搅拌0.5h，再利用逆时针搅拌0.5h，将二者搅拌均匀。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：