[发明专利]一种护眼液生产用干细胞外泌体提取工艺

说明书

本发明公开了一种护眼液生产用干细胞外泌体提取工艺，其提取方法包括如下步骤：首先使用含无外泌体血清的培养基培养人脂肪来源间充质干细胞，得到培养上清液，然后培养上清液进行第一次离心处理，并取上清液。本发明通过使用含无外泌体血清的培养基培养人脂肪来源间充质干细胞，避免使用大量脂肪组织和细胞，造成浪费，且省时省力，在得到培养上清液后，先后通过第一离心、第二离心和第三离心后得到外泌体并通过除菌过滤，最终得到外泌体，相对传统的提取工艺能够有效避免脂肪干细胞提取的细胞活力受到损伤，同时通过该工艺还能够保证消化液不会损伤提取出来的脂肪干细胞，并且步骤简单，操作方便。

技术领域

本发明涉及护眼液生产技术领域，具体为一种护眼液生产用干细胞外泌体提取工艺。

背景技术

护眼液是眼科疾病最常用的药物剂型之一，对于许多眼病，护眼液都有直接、快捷的治疗作用，护眼液是眼科疾病最常用的药物剂型之一，对于许多眼病，护眼液都有直接、快捷的治疗作用，随着人们的生活方式和工作条件的改变，用眼的时间越来越多，比如长时间看电脑、看电视、玩电子游戏等等，很容易患视觉疲劳症和干眼症。

近年来，外泌体凭借其大小及双分子膜等优势在多种疾病模型中呈现出了较细胞水平更为卓越的治疗效果，随着外泌体研究增多，人脂肪来源间充质干细胞外泌体的相关研究也日益增多，外泌体是一种被大多数细胞分泌的微小膜泡，目前干细胞外泌体护眼液具有减少细胞凋亡、减轻炎症反应、促进血管生成、抑制纤维化、提高组织修复潜力等重要生物学功能，能够达到了促进眼部血管新生的优点，能够对使用者的眼部进行养护的同时，也能够促进使用者的眼部血管新生，能够满足使用者的使用需求，然而，现有提取hADSCs及外泌体方法需要大量脂肪组织和细胞，不仅存在价格昂贵、费时费力的缺点，而且提取脂肪干细胞方法常使用机械设备，容易使得脂肪干细胞提取的细胞活力受到损伤，消化液也会损伤提取出来的脂肪干细胞，而且步骤冗杂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种护眼液生产用干细胞外泌体提取工艺，具备高效的优点，解决了现有提取hADSCs及外泌体方法需要大量脂肪组织和细胞，不仅存在价格昂贵、费时费力的缺点，而且提取脂肪干细胞方法常使用机械设备，容易使得脂肪干细胞提取的细胞活力受到损伤，消化液也会损伤提取出来的脂肪干细胞，而且步骤冗杂的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种护眼液生产用干细胞外泌体提取工艺，其提取方法包括如下步骤：

A：首先使用含无外泌体血清的培养基培养人脂肪来源间充质干细胞，得到培养上清液；

B：然后培养上清液进行第一次离心处理，并取上清液，然后进行第二次离心处理，并取上清液，且得到离心液；

C：然后进行第三次离心处理，沉淀外泌体，并通过过滤器进行过滤除菌处理；

D：然后根据外泌体的大小，从蛋白质和其他大分子中分离得出外泌体。

优选的，所述在步骤A中，用含无外泌体血清的培养基培养人脂肪来源间充质干细胞的时间为24-48h。

优选的，所述在步骤B中，第一离心以300g的离心力，进行10分钟离心处理，得到上清液，第二离心以2000g的离心力，进行10分钟离心处理，得到上清液。

优选的，所述在步骤C中，第三离心以10000g的离心力，进行离心30分钟，取上清液，使用微柱多孔硅纤毛结构以分离40-100nm外泌体。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：