[发明专利]一种甘胆酸均相酶免疫测定试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种甘胆酸均相酶免疫测定试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，其特征在于，所述R1试剂中包括缓冲液、抗甘胆酸特异性抗体、L-乳酸锂、稳定剂、防腐剂和表面活性剂；所述R2试剂中包括缓冲液、β-NAD⁺、乳酸脱氢酶-甘胆酸偶联物、保护剂和防腐剂。

2.根据权利要求1所述的甘胆酸均相酶免疫测定试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中乳酸脱氢酶-甘胆酸偶联物和β-NAD⁺的体积质量比为1mL：1～5g。

3.根据权利要求1所述的甘胆酸均相酶免疫测定试剂盒，其特征在于，所述R1试剂的pH为7.0～8.0，具体包括：50～500mM缓冲液，1～10g/L抗甘胆酸特异性抗体，0.5～5g/L L-乳酸锂，0.1～10g/L稳定剂，0.5～5mL/L防腐剂，质量浓度0.05～1％表面活性剂；

所述R2试剂的pH为6.5～7.5，具体包括：50～500mM缓冲液，4～10g/Lβ-NAD⁺，1～5mL/L乳酸脱氢酶-甘胆酸偶联物，10～100g/L保护剂，0.5～5mL/L防腐剂。

4.根据权利要求1所述的甘胆酸均相酶免疫测定试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为HEPES缓冲液、PBS缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、Tris缓冲液、MOPS缓冲液、TAPSO缓冲液、MES缓冲液、PIPES缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的甘胆酸均相酶免疫测定试剂盒，其特征在于，所述稳定剂为EDTA·2Na、EDTA·3Na、EDTA·2NaMn、EDTA·Zn、PVP-K30、PVP-K90中的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的甘胆酸均相酶免疫测定试剂盒，其特征在于，所述保护剂为蔗糖、海藻糖、葡聚糖、甘露醇、乳糖醇、山梨醇中的一种或多种。

7.权利要求1-6任一项所述的甘胆酸均相酶免疫测定试剂盒的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

S1：R1试剂的制备：向缓冲液中依次加入L-乳酸锂、抗甘胆酸特异性抗体、稳定剂、防腐剂和表面活性剂，定容得到R1试剂；

S2、乳酸脱氢酶-甘胆酸偶联物的制备：将甘胆酸溶解后加入活化剂进行活化，然后加入乳酸脱氢酶进行偶联，得到乳酸脱氢酶-甘胆酸偶联物；

S3、R2试剂的制备：向缓冲液中依次加入β-NAD⁺、乳酸脱氢酶-甘胆酸偶联物、保护剂和防腐剂，定容得到R2试剂。

8.根据权利要求7所述的甘胆酸均相酶免疫测定试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤S2的具体为：①将甘胆酸溶解于MES缓冲液中，加入活化剂EDC进行活化，其中EDC和甘胆酸的质量比为1：50～500，在温度为18～42℃条件下搅拌活化5～20min；②活化后加入乳酸脱氢酶，其中乳酸脱氢酶和甘胆酸的质量比为1：50～500，在温度为18～42℃条件下搅拌偶联0.5～3h，得到乳酸脱氢酶-甘胆酸偶联物粗品；③将上述乳酸脱氢酶-甘胆酸偶联物粗品用PBS缓冲液进行透析提纯8～24h，即得到乳酸脱氢酶-甘胆酸偶联物。

9.一种如权利要求7所述的甘胆酸均相酶免疫测定试剂盒的在检测甘胆酸含量中的应用。