[发明专利]一种复方丹参片细胞指数溶出动力学研究方法

说明书

本发明公开的属于复方丹参片研究技术领域，具体为一种复方丹参片细胞指数溶出动力学研究方法，该复方丹参片的细胞生物效应的筛选方法的具体步骤如下：S1：复方丹参片细胞指数溶出动力学模型的建立，S2：复方丹参片以特异性依赖细胞的生物效应为指标的细胞指数溶出动力学研究，S3：物质组累积溶出度和细胞指数累积溶出度比较。采用Kalman滤波算法计算中药及其复方制剂在介质中释放溶出物质组各组分间的相互关系，获得溶出介质中的物质组的含量，实现了对多组分的中药及其复方制剂的释放溶出特征的定量描述，对中药及其复方制剂溶出度评价具有重要意义。

技术领域

本发明涉及复方丹参片研究技术领域，具体为一种复方丹参片细胞指数溶出动力学研究方法。

背景技术

由于中药复方固体制剂的成分组成复杂，具有多成分、多靶点和整体作用的特点，复方多元成分的性质与体内外行为各异，释放溶出机制不一致，目前常用的以一个或几个化学单体成分作为指标，进行体内外释放机制与吸收过程研究，并不能获得中药固体制剂设计与质量评价的完整参数，也不能真实反应中药复方制剂的整体效应特征。目前，以中药复方制剂整体作为研究对象的体内外溶出机理的研究报道较少，中药复方固体制剂的整体体外溶出特性和体内过程及功效特征研究是本领域的研究难点，也是不可回避的研究重点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种复方丹参片细胞指数溶出动力学研究方法，以解决上述背景技术中提出的以中药复方制剂整体作为研究对象的体内外溶出机理的研究报道较少，中药复方固体制剂的整体体外溶出特性和体内过程及功效特征研究是本领域的研究难点的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种复方丹参片细胞指数溶出动力学研究方法，该复方丹参片的细胞生物效应的筛选方法的具体步骤如下：

S1：复方丹参片细胞指数动力学模型的建立：

H9C2细胞的培养；

溶液的配制：空白人工胃液、空白人工肠液、磷酸盐缓冲液；

复方丹参片溶出度供试样品的制备：

(1)不同溶出时间样品，取复方丹参片1片约0.32g，精密称定，取空白人工胃液1000mL置溶出杯中，加热至37℃，调节转篮转速为100r/min，将精密称定质量的复方丹参片分别放入转篮内，以空白人工胃液接触药片时为零时刻开始计时，然后按10、20、30、40、50、60、70、80min定时取样，每次取样10mL，用pH7.4磷酸盐缓冲液调节至pH6.8，取10mL于蒸发皿水浴蒸干，用1mL细胞培养液溶解，微孔滤膜滤过，取续滤液即得；

(2)完全溶出样品，另取复方丹参片10片，精密称定，计算出平均片质量，将称定的片剂研细，再精密称取相当于平均片质量的量，置1000mL量瓶中，加入空白人工胃液至刻度，混匀，置于37.0±0.5℃水浴中2h以上，每隔15min振摇1次。冷至室温，取10mL，用pH7.4的磷酸盐缓冲液调节至pH6.8，精确测量体积，于蒸发皿水浴蒸干，用1mL细胞培养液溶解，微孔滤膜滤过，取续滤液即得；

RTCA测定及累积溶出度测定，将H9C2细胞置于含10％FBS的DMEM培养基中、在37℃下、5％CO₂、饱和湿度培养箱中培养。取对数生长期的细胞，1000r/min离心5min，计数板下计数，调整细胞浓度至2×10⁴个/mL，RTCA板每孔中加入100μL细胞悬液，贴壁培养过夜，24h后，换液，按照要求加入“2.1.3”项下的复方丹参片溶出度供试样品溶液200μL，继续检测72h，得到样品溶液作用于H9C2细胞后所产生的TCRPs曲线；

复方丹参片细胞指数溶出动力学模型拟合；

S2：复方丹参片以特异性依赖细胞的生物效应为指标的细胞指数溶出动力学研究：

H9C2细胞的培养；

溶液的配制；