[发明专利]血清中TMAO及其相关代谢物的检测方法

说明书

本发明提供了一种血清中TMAO及其相关代谢物的检测方法。该方法包括：S1，配制TMAO及其相关代谢产物的标准溶液；S2，选取两种氘代化合物作为内标，将蛋白沉淀剂和内标配制内标标准溶液；S3，将标准溶液与内标标准溶液混合，得到标准待测液；对标准待测液依次进行超高效液相色谱分离及质谱检测，获得标准曲线；S4，将待测血清和内标标准溶液混合，离心，取上清液作为待测样品；S5，对待测样品依次进行超高效液相色谱分离及质谱检测，与标准曲线进行比对，分别得到待测血清中TMAO及其相关代谢产物的含量。本发明实现了对TMAO及其相关代谢产物的绝对定量，特异性强、灵敏度高、运行时间短、操作简便快捷。

技术领域

本发明涉及生物分析技术领域，具体而言，涉及一种血清中TMAO及其相关代谢物的检测方法。

背景技术

氧化三甲胺(TMAO)，是一种广泛存在于海产品中的甲胺类化合物，参与机体多种重要的生物学功能，包括调节渗透压、稳定蛋白质结构、诱食和促生长等作用。人体中的TMAO水平除受摄食含有TMAO的海产品影响外，还可通过摄食胆碱在体内代谢而产生，在摄入富含胆碱的食物后，大部分在肠道中的微生物菌群作用下生成三甲胺(TMA)，TMA随着血液循环系统进入肝脏，而肝脏中含有黄素单氧化酶，在肝黄素单氧化酶的作用下TMA被氧化生成TMAO。

近年来，随着对肠道菌群研究的深入，发现TMAO及其代谢物的水平与心血管疾病、心梗死、卒中、糖尿病、慢性肾病、癌症等多种疾病密切相关，而对TMAO的深入研究为探索TMAO代谢、相关疾病发病机理、诊断、治疗及预防等方面提供了重要的参考价值，因此实现对血清中TMAO及其代谢物的绝对定量为临床诊断、科学研究等领域提供了可靠的依据。

目前LC-MS方法大多只能检测TMAO一种物质，并不涉及相关代谢及前体的检测，导致检测结果不全面，准确度不可靠。除此之外的检测技术还包括毛细管电泳法、气质联用法及酶联免疫法等，然而毛细管电泳法重复性较差，不宜采用；气质联用法灵敏度虽高，但存在局限性，还需对目标化合物进行衍生等手段，操作繁琐，也不宜采用；酶联免疫法被广泛使用，但其反应原理是会造成抗体间的交叉反应，该缺陷导致方法的灵敏度不高，所以也不宜采用，

总之，现有技术大多只能检测TMAO一种物质，且操作过程较繁琐，检测结果不全面，准确度极不可靠。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种血清中TMAO及其相关代谢物的检测方法，以解决现有技术中血清中TMAO检测时存在的只能检测TMAO一种物质、操作过程较繁琐、检测结果不全面、准确度不可靠等问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种血清中TMAO及其相关代谢物的检测方法，其包括以下步骤：S1，配制TMAO、左旋肉碱、甜菜碱、肌酸酐、胆碱的标准溶液；S2，选取TMAO、左旋肉碱、甜菜碱、肌酸酐、胆碱中两种的氘代化合物作为内标，将蛋白沉淀剂和内标配制内标标准溶液；S3，将标准溶液与内标标准溶液混合，得到标准待测液；对标准待测液依次进行超高效液相色谱分离及质谱检测，得到第一检测数据；根据第一检测数据，标准溶液中TMAO、左旋肉碱、甜菜碱、肌酸酐、胆碱的含量及标准待测液中内标的含量，获得标准曲线；S4，将待测血清和内标标准溶液混合，离心，取上清液作为待测样品；S5，对待测样品依次进行超高效液相色谱分离及质谱检测，得到第二检测数据，将第二检测数据与标准曲线进行比对，分别得到待测血清中TMAO、左旋肉碱、甜菜碱、肌酸酐、胆碱的含量。