[发明专利]一种与小麦抗白粉病基因Pm37紧密连锁的KASP分子标记及其应用

权利要求书

1.一种与小麦抗白粉病基因Pm37紧密连锁的KASP分子标记，其特征在于，所述KASP分子标记为YTU37-K85，其KASP分子标记YTU37-K85的引物包括抗病位点上游引物YTU37-K85-F、感病位点上游引物YTU37-K85-H和共用下游引物YTU37-K85-C；

所述抗病位点上游引物YTU37-K85-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述感病位点上游引物YTU37-K85-H的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述共用下游引物YTU37-K85-C的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

2.一种权利要求1所述的与小麦抗白粉病基因Pm37紧密连锁的KASP分子标记在检测小麦抗白粉病基因Pm37的应用，所述应用的范围是基因Pm37通过杂交转育到30种感病品种的后代；所述30种感病品种为烟农187、山农1538、山农202、周麦27、中育1311、烟1212、济麦229、泰农18、中育9398、涡麦8、邯麦13、岱麦2173、武农6、郑麦085、良星619、泰麦1918、石麦15、青麦6、济南17、烟农21、济麦21、石新633、济麦20、泰农1014、鲁辰185、淮麦226、冀麦268、西农979、辉县红、宁麦13。

3.一种权利要求1所述的与小麦抗白粉病基因Pm37紧密连锁的KASP分子标记在进行抗白粉病基因Pm37的小麦工程育种和分子标记辅助选择育种中的应用，所述应用的范围是基因Pm37通过杂交转育到30种感病品种的后代；所述30种感病品种为烟农187、山农1538、山农202、周麦27、中育1311、烟1212、济麦229、泰农18、中育9398、涡麦8、邯麦13、岱麦2173、武农6、郑麦085、良星619、泰麦1918、石麦15、青麦6、济南17、烟农21、济麦21、石新633、济麦20、泰农1014、鲁辰185、淮麦226、冀麦268、西农979、辉县红、宁麦13。

4.一种权利要求2所述的应用，其特征在于，检测小麦抗白粉病基因Pm37包括以下步骤：

（1）提取待测样品的小麦基因组DNA，作为模板；

（2）利用所述KASP分子标记YTU37-K85的引物对待测样品的基因组DNA进行PCR扩增，获得扩增产物；

所述KASP分子标记YTU37-K85的引物包括抗病位点上游引物YTU37-K85-F、感病位点上游引物YTU37-K85-H和公用下游引物YTU37-K85-C；所述抗病位点上游引物YTU37-K85-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述感病位点上游引物YTU37-K85-H的核苷酸序列如SEQID NO:2所示；所述共用下游引物YTU37-K85-C的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

（3）采用荧光定量PCR检测仪分析PCR扩增产物基因型；37℃测量荧光信号，Bio-RadCFXManager 3.1读取分型结果；分型结果为携带基因Pm37的纯合抗病的基因型、携带基因Pm37的杂合抗病基因型和不携带基因Pm37的感病基因型。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为：10-30ng/μLDNA 3.0μL，2×KASP Maseter Mix 5.0μL，引物混合液 0.12μL，ddH2O 1.88μL，总体系为10.0μL；其引物混合液中所述抗病位点上游引物YTU37-K85-F和感病位点上游引物YTU37-K85-H的浓度均为12μM；共用下游引物YTU37-K85-C的浓度为30 μM。

6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性15分钟；94℃变性20秒，然后64℃梯度退火并延伸60秒，10个循环，每个循环退火及延伸的温度降低0.6℃；94℃变性20秒，然后58℃退火并延伸60秒，38个循环。