[发明专利]一种白芨植株再生体系的建立方法

说明书

本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种白芨植株再生体系建立的方法。其中包含以白芨成熟种子作为外植体，依次经过诱导种子萌发、诱导增殖、壮苗培养及诱导生根的建立白芨植株再生体系的过程。所述诱导种子萌发所用培养基为1/2MS基础中添加NAA和6‑BA；所述诱导增殖培养基是在1/2MS基础上添加GA3、NAA和活性炭；所述壮苗培养基是在改良MS基本培养基上添加了土豆泥和活性炭；所述诱导生根培养基是MS培养基上添加了NAA。本发明可解决白芨育苗周期长、组培育苗移栽成活率不高的问题，为降低成本、培育高品质、高产量、次生代谢产物含量高的药用植物品种奠定基础。

技术领域

本发明属于植株组织培养技术领域，涉及一种白芨植株再生体系的建立方法。

背景技术

白芨(Bletilla striata (Thunb. ex A. Murray) Rchb. f.)是兰科(Orchidaceae)白芨属(Bletilla)植物，是我国一种重要的珍稀药用植物。目前我国该属植物有4种，分别为白芨、小白芨、黄花白芨和华白芨，主要分布于我国长江流域及其以南各省区，全国主产地有贵州、四川、湖南、湖北、安徽、浙江、江苏等地。白芨药用部分为其干燥块茎，具有收敛止血、消肿生肌等功效，可用于治疗皮肤皲裂，疮疡肿毒，吐血、咳血，外伤出血等症状,从白芨中提取的天然多糖聚合物也可应用于医药活性材料。另外，由于白芨内含多糖活性成分可用于活血润肤，且作用温和、刺激小、安全性高等特点，目前已逐步成为化妆品新产品开发的热点。随着白芨应用市场的不断扩大，其市场供需矛盾也日益显著。

白芨能产生大量种子，其单个果荚内约有10~30万粒，然而白芨种子小且无胚乳，无法在自然状态下萌发，一般自然条件下靠分株繁殖。由于营养繁殖并非基于遗传意义上的重新开始，而是母体生长的延续，长此以往必然引起白芨资源品质退化。因此，适当采用种子繁殖尤为重要。

2002年，白芨已列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》附录一，属国家野生植物保护名录二级保护植物区系(第二批)。而目前药用植物中以生物技术为依托建立快繁体系的药用植物品种已有200-100种。以白芨种子为外植体，运用植物组织培养等生物技术进行白芨快繁实验研究受到越来越多研究人员的关注，白芨种子量大，繁殖系数可观，且用种子繁殖利于其优良品种选育及驯化，目前白芨植株再生体系建立研究结果较多，但在其品质质量、培养周期上无法突破。通过对白芨再生体系过程中大量元素及其添加物等的探究，优化集成白芨育苗壮苗两步培养法，提高后期炼苗驯化成活率，为兰科植物育苗质量低下、栽培成活率不高等问题提供技术理论参考依据，促进以生物技术为基础的生物多样性保护及生物种质资源的推广应用。

发明内容

本发明提供一种白芨植株再生体系的建立方法，通过植物组织培养的方法建立育苗周期短、高品质高质量的白芨植株再生体系。

本发明技术方案：

一种白芨植株再生体系的建立方法，包括以下步骤：

1）外植体灭菌及种子萌发的诱导：取授粉后20周的白芨蒴果，经灭菌后，切开蒴果取白芨种子，将所取的白芨种子接种于诱导萌发培养基中培养，获得萌发的白芨小苗；

2）白芨增殖诱导：将步骤1）获得的萌发白芨小苗转接到增殖培养基中进行培养，得到白芨丛生芽苗；

3）白芨壮苗培养：将步骤2）获得的白芨小苗转接于壮苗培养基中培养，得到白芨壮苗；

4）白芨生根诱导培养：将步骤3）获得的白芨壮苗转接于生根诱导培养基中培养，得到完整白芨植株；

完成白及植株再生体系的建立。

优选地，所述步骤1）中诱导种子萌发的培养基为1/2MS基础上添加了NAA（0.01mg/L ~2 mg/L）和6-BA（0.01 mg/L ~2 mg/L）。