[发明专利]一种鉴定ALDOB基因同时含两个突变位点位置的试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种鉴定ALDOB基因同时含两个突变位点位置的试剂盒及方法。所述试剂盒中含有如下引物对：F1：GATAGCATTGAGGTTGAGAGTCG；R1：CCTGTTAATTATTTGTATCCACAGTTAGAGC；F2：GATAGCATTGAGGTTGAGAGAGT；R2：CCTGTTAATTATTTGTATCCACAGTTAGTCT；所述两个突变位点为C.839CA、C.331CT突变位点。本发明能够鉴定C.839CA、C.331CT突变位点是在同一条染色体，还是不同的染色体上，工作量小，耗时短，易操作。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，具体涉及一种鉴定PAH基因同时含两个突变位点(C.839CA、C.331CT)位置的试剂盒及方法。

背景技术

遗传性果糖不耐受症是一种常染色体隐性遗传的果糖代谢病，由编码果糖-1，6-二磷酸醛缩酶B的ALDOB基因发生致病变异所致。醛缩酶由A、B、C3种同工酶组成，其主要在肝脏、肾脏和小肠表达。遗传性果糖不耐受是由于醛缩酶B活力降低，导致1-磷酸果糖在肝脏、肾、肠中堆积，使肝糖原分解和糖异生受抑制，表现为低血糖发作，如未能及时诊治可导致严重肝病、低血糖脑病及肾损害，有潜在致命危险。疑诊病例应进行ALDOB单基因分析或者与糖代谢相关基因包序列分析，如果存在ALDOB单基因纯合或者复合杂合致病突变可以确诊。

不同的ALDOB基因的突变对ALDOB活性及结构影响的程度不同。针对于本案中涉及到的两个突变位点，发生在同一条或者不同的染色体上，对患者病情严重程度的影响是不同的。如果两个突变发生在同一条染色体上，则不致病；两个突变分别发生在不同的染色体上，则致病。为了评估疾病的严重程度，鉴定已知的不同的ALDOB基因突变分布在同一条还是不同染色体上，对疾病的诊断具有决定性作用。现有的方法是提取DNA，构建载体，进行体外表达实验，需要全套的分子生物学及微生物、细胞培养的实验室，难度极大，且工作量大，耗时长，普通实验室难以实施。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种鉴定ALDOB基因同时含两个突变位点位置的试剂盒及方法。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

鉴定ALDOB基因同时含两个突变位点位置的试剂盒中含有如下引物对：

F1：GATAGCATTGAGGTTGAGAGTCG(SEQ ID NO.1)

R1：CCTGTTAATTATTTGTATCCACAGTTAGAGC(SEQ ID NO.2)

F2：GATAGCATTGAGGTTGAGAGAGT(SEQ ID NO.3)

R2：CCTGTTAATTATTTGTATCCACAGTTAGTCT(SEQ ID NO.4)；

所述两个突变位点为：C.839CA、C.331CT突变位点。

优选地，引物对按如下排列组合使用：

①：F1+R1

②：F1+R2

③：F2+R1

④：F2+R2。

优选地，根据C.839CA、C.331CT突变分布情况，引物对按如下排列组合使用：

①：当待测样本同时含C.839CA、C.331CT突变但分布在不同染色体上时：F1+R2或F2+R1；其中，F1和R1是检测野生型的引物；

②当待测样本同时含C.839CA、C.331CT突变且分布在同一条染色体上时：F2+R2。