[发明专利]一种鉴定MEFV基因同时含两个突变位点位置的试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种鉴定MEFV基因同时含两个突变位点位置的试剂盒及方法。所述试剂盒中含有如下引物对：F1：CAGGGCGACCTCCTCAATGGGCC；R1：GCAGAAGGAGTGCAGGCCCTTGG；F2：CAGGGCGACCTCCTCAATGGCGT；R2：GCAGAAGGAGTGCAGGCCCTACC；所述两个突变位点为C.1229GA、C.688GC突变位点。本发明能够鉴定C.1229GA、C.688GC突变位点是在同一条染色体，还是不同的染色体上，工作量小，耗时短，易操作。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，具体涉及一种鉴定PAH基因同时含两个突变位点(C.1229GA、C.688GC)位置的试剂盒及方法。

背景技术

MEFV基因发生致病突变可导致家族性地中海热(FMF)，为常染色体隐性遗传的疾病，临床以反复发作的短暂的炎性反应和浆膜炎为主要表现，亦可以淀粉样变为首发症状。MEFV基因突变导致其编码的蛋白Pyrin减少，Pyrin蛋白抑制NALP3-炎症复合体的作用减弱，从而使NALP3-炎症复合体过度活化，产生炎性反应。约70％的FMF患者体内存在MEFV基因突变，检测有无MEFV基因突变及突变的类型，可帮助明确诊断。

不同的MEFV基因的突变对MEFV活性及结构影响的程度不同。针对于本案中涉及到的两个突变位点，发生在同一条或者不同的染色体上，对患者病情严重程度的影响是不同的。如果两个突变发生在同一条染色体上，则不致病；两个突变分别发生在不同的染色体上，则致病。为了评估疾病的严重程度，鉴定已知的不同的MEFV基因突变分布在同一条还是不同染色体上，对疾病的诊断具有决定性作用。现有的方法是提取DNA，构建载体，进行体外表达实验，需要全套的分子生物学及微生物、细胞培养的实验室，难度极大，且工作量大，耗时长，普通实验室难以实施。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种鉴定MEFV基因同时含两个突变位点位置的试剂盒及方法。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

鉴定MEFV基因同时含两个突变位点位置的试剂盒中含有如下引物对：

F1：CAGGGCGACCTCCTCAATGGGCC(SEQ ID NO.1)

R1：GCAGAAGGAGTGCAGGCCCTTGG(SEQ ID NO.2)

F2：CAGGGCGACCTCCTCAATGGCGT(SEQ ID NO.3)

R2：GCAGAAGGAGTGCAGGCCCTACC(SEQ ID NO.4)；

所述两个突变位点为：C.1229GA、C.688GC突变位点。

优选地，引物对按如下排列组合使用：

①：F1+R1

②：F1+R2

③：F2+R1

④：F2+R2。

优选地，根据C.1229GA、C.688GC突变分布情况，引物对按如下排列组合使用：

①：当待测样本同时含C.1229GA、C.688GC突变但分布在不同染色体上时：F1+R2或F2+R1；其中，F1和R1是检测野生型的引物；

②当待测样本同时含C.1229GA、C.688GC突变且分布在同一条染色体上时：F2+R2。

基于上述试剂盒鉴定同时含C.1229GA、C.688GC突变位点的方法是采用所述试剂盒中的引物对，在如下次序和条件下进行扩增检测：

①：94℃，5min；