[发明专利]一种小鼠抗人IgG单克隆抗体

说明书

本发明公开了一种小鼠抗人IgG单克隆抗体，所述单克隆抗体具有如SEQ ID NO.26、28、30所示的重链可变区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列，和SEQ ID NO.42、44、46所示的轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列。本发明同时提供了编码所述单克隆抗体的核酸分子、含有所述核酸分子的表达载体和宿主细胞。本发明的单克隆抗体应用于免疫检测具有较高的灵敏性和特异性。

技术领域

本发明属于细胞免疫学、基因工程领域，涉及一种小鼠抗人IgG单克隆抗体。

背景技术

酶联免疫吸附实验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一类常用的免疫酶技术。主要方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，然后利用酶标记的抗体或抗原与之孵育，加入显色剂显色，通过酶标仪测定待测物颜色与标准物颜色的差异，得到定性或定量的结果。根据待测物不同(检测抗原或者检测抗体)以及测定原理的不同，ELISA又可以分为许多种类，如直接法、间接法、竞争法、夹心法等。

间接ELISA是用已知抗原测定未知抗体的一种有效方法，在传染病实验室诊断及疫苗接种效果评价都起到重要作用。其基本操作步骤是先将抗原结合到酶标板上，随后分两步进行检测：首先加入待检测抗体(一抗)与抗原特异性结合，随后加入酶标二抗检测并利用底物显色。与直接ELISA相比，间接ELISA使用酶标二抗，具有更高的灵敏度。间接ELISA还提供了更大的灵活性，因为针对不同抗原靶标的一抗一同使用。

传统间接ELISA缺点是存在交叉反应的可能性，表现为背景高，容易造成假阳性误判。究其原因，在排除抗原包被及封闭过程中的问题外，主要存在于酶标二抗设计上。下面以抗人IgG二抗为例进行阐述，第一，传统的二抗大多为多抗，如兔抗人IgG等，是用纯化的人IgG免疫兔子获得。人IgG抗体由重链和轻链(kappa或lambda)组成，免疫兔子后都能刺激动物免疫系统产生针对人IgG抗体重链和轻链的抗体，而人血清中IgM、IgA、IgE等抗体的轻链与IgG的轻链是相同的，即是kappa或lambda，这样在做间接ELISA检测某一种包被抗原特异性的人IgG时，由于二抗的不纯(同时含有针对重、轻链的抗体)就会造成了假阳性结果或者高背景。第二，由于对制备二抗的动物(如兔子)免疫背景不甚清楚，兔子本身就存在着针对包被抗原的抗体(隐性感染造成)，在做间接ELISA检测时，二抗中针对包被抗原的抗体就可以直接与包被抗原结合，造成假阳性结果或者高背景。

针对上述不足，本专利所描述的是人IgG抗体重链特异性单克隆抗体的制备和鉴定过程。与同一批制备的抗体相比，0070非常适合作为测定人IgG抗体滴度的间接ELISA的二抗，能降低整个反应体系的背景和放大特异性结合的信号。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种人IgG抗体重链特异性单克隆抗体及其制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面提供了一种抗IgG单克隆抗体，所述单克隆抗体包含三个CDR的重链可变区和三个CDR的轻链可变区；其中，所述重链可变区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.26、28、30所示，轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.42、44、46所示。

进一步，所述重链可变区还包括重链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4；轻链可变区还包括轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4，其中，重链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.32、34、36、38所示；轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.48、50、52、54所示。

进一步，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.40所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.56所示。