[发明专利]SLIT3在制备肺腺癌手术患者预后诊断的试剂盒中的应用

说明书

本发明公开了SLIT3在制备肺腺癌手术患者预后诊断的试剂盒中的应用。发明人通过RNA测序(RNA‑seq)鉴别根治手术后13个肺腺癌组织和5个正常肺组织之间的差异表达基因(differentially expressed genes，DEGs)，应用基因本体(gene ontology，GO)和KEGG进行分析，通过qRT‑PCR在临床标本、肺腺癌细胞系和正常人支气管上皮细胞系以及来自GEPIA的一个验证队列中确认DEGs的表达，通过生存曲线分析验证，证明SLIT3可作为生物标记物预测肺腺癌手术切除患者的预后情况。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及SLIT3在制备肺腺癌手术患者预后诊断的试剂盒中的应用。

背景技术

肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因。在肺癌的各种病理分型中，肺腺癌(LUAD)约占肺癌的40％，是肺癌最常见的组织病理亚型，其发病率和死亡率均呈上升趋势。绝大多数患者确诊时已是晚期并伴有局部和远处转移性播散，限制了肺腺癌患者的手术选择。然而，早期肺腺癌患者即使行根治性手术切除，预后仍较差。据统计，约50％的患者术后5年内有肿瘤复发或转移，大部分复发或转移发生在手术治疗后1年内。因此，急需有预测性的生物标志物来评估手术切除的肺腺癌患者的早期疗效和预后，这将有助于及时选择辅助治疗，提高患者的预后。

近年来的研究中确定了许多基因作为肺癌的预后生物标志物候选基因，包括肺腺癌。比如，通过免疫组织化学染色法和Me4FDG PET发现钠依赖性葡萄糖转运蛋白2(SGLT2)在肺部恶性肿瘤和早期或低级别LUAD中高表达并发挥积极作用，靶向抑制SGLT2在小鼠模型中可显著降低肿瘤生长和延长生存时间，表明SGLT2是早期LUAD潜在的诊断和治疗靶点。基于液滴数字化PCR的DNA甲基化分析发现，高水平HOXA9甲基化单独或合并血管侵犯(BVI)可能导致I期LUAD患者具有较高的侵袭风险或更坏的结局。目前，转录组学分析，如RNA测序(RNA-seq)和微阵列分析等用于发现新的预测性生物标志物，用于肺癌的诊断、预后和疗效评估。RNA-seq是目前转录水平分析基因表达模式的首选方法，其准确性、敏感性和特异性更高，动态范围更广，优于微阵列分析。如基于LUAD患者RNA-seq和10倍scRNA-seq数据的综合分析，发现与肺泡细胞相比，LUAD细胞中有51个基因发生显著改变，其中HMGA1和EMC6的高表达与预后不良相关。然而，目前仍缺乏可靠和可重复的生物标记物预测LUAD切除术后患者的预后与疗效，以指导辅助治疗的选择。

SLIT3(Slit homolog 3protein)是一种由SLIT3基因编码的分泌蛋白，属于slit家族。在哺乳动物中，Slit家族包括3个成员，分别为SLIT1、SLIT12和SLIT1 3。SLIT1局限在神经元中，而SLIT2和SLIT3在哺乳动物组织中广泛表达，其失调已在恶性组织中被发现。SLIT2在许多人类癌症中经常被灭活，包括肺癌，SLIT2的肿瘤抑制作用如抑制肿瘤细胞侵袭和迁移、血管生成和生长已得到充分研究。类似的，SLIT3的高甲基化和随后的下调在一些癌症中已经被报道。SLIT3已被证实可通过调控Vimentin、E-cadherin、MMP2和MMP9的表达，抑制癌细胞的生长和侵袭迁移。SLIT3沉默可增强LUAD细胞系A549的侵袭能力。然而，目前仍然缺乏针对SLIT3在癌症中特别是在LUAD中的临床病理和预测意义的综合分析。

发明内容

本发明的主要目的在于提供SLIT3在制备肺腺癌手术患者预后诊断的试剂盒中的应用。

所述试剂盒为检测SLIT3表达水平的试剂盒。

更准确的，所述SLIT3的低表达预示肺腺癌手术患者预后不良。

所述试剂盒为实时定量PCR检测试剂盒。

更具体的，所述试剂盒包含有检测用引物，其具体序列为：

上游引物，5′-TCAATGCCAACAAGATCAACTG-3′；