[发明专利]miR164a在应答亚洲棉耐盐中的应用

说明书

本发明属于生物技术领域，提出了一种miR164a在应答亚洲棉耐盐中的应用，miR164a及前体基因它来自于亚洲棉品种Shixiya1，将前体基因插入经改造的棉花叶皱缩病毒(CLCrV)沉默载体系统中，获得亚洲棉CLCrV:miR164a重组表达载体，将重组表达载体转化到农杆菌菌株GV3101中，转染亚洲棉。实验结果表明miR164a负调节棉花对盐的胁迫应答，通过调控植株中miR164a的表达量，可以调控植株应答盐胁迫的能力，从而提高植株抗性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及miR164a在应答亚洲棉耐盐中的应用。

背景技术

亚洲棉是重要的天然纤维作物和油料作物之一，具有较高的经济价值，并且是抗旱耐盐先锋。亚洲棉属于非粮食作物，具有一定耐干旱盐碱的能力，亚洲棉是一种主要的栽培亚洲棉和有用的育种资源，具有很强的遗传稳定性和对一系列胁迫的良好抗性。随着全球气候变化，许多环境因素(如养分流失、土壤盐渍化和温室效应)严重制约农业产业的发展。其中，盐胁迫是植物生长和发育的主要威胁。每年，它都会在世界范围内造成亚洲棉纤维和种子产量的巨大损失。包括亚洲棉在内的植物已经进化出对应的反应和调节机制，以避免或抵抗外源胁迫。

miRNAs被转录并切割成一系列保守的小的非编码RNA，通常长度为18-22个核苷酸(Nt)。它们可以结合到下游的靶基因的mRNA上，通过翻译抑制或切割来转录后调节它们的表达。已有大量文献报道miRNA参与植物应答干旱、冷、热、ABA处理，紫外处理等多种胁迫应答过程，例如miR319，miR396c，miR394参与植物应答盐胁迫。陆地棉中一个新发现的miRNA，通过调控靶标CHR基因来响应盐胁迫。研究miRNAs调控植物耐盐将有助于理解亚洲棉中逆境响应miRNAs的动态特征和生物学功能，为亚洲棉育种提供更多的分子和机理数据。研究植物耐盐相关的功能基因对于提高植物耐盐性，降低盐胁下的产量的损失，对造福农业生产有着重要的意义。

发明内容

本发明提出一种miR164a及miR164a前序基因在应答亚洲棉耐盐中的应用，通过调控miR164a的表达量可用于调控目的植物应答盐胁迫的能力，从而提高植株抗性。

本发明的技术方案是这样实现的：一种miR164a在应答亚洲棉耐盐中的应用，所述miR164a的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。

进一步地，通过调控所述miR164a在亚洲棉中的表达量负调控亚洲棉耐盐碱能力。

进一步地，所述miR164a的前序基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示。

进一步地，将所述miR164a的前序基因用限制性内切酶SpeI和AscI双酶切，连接到亚洲棉叶皱缩病毒的pCLCrVA中，得到重组表达载体。

进一步地，将所述重组表达载体转入农杆菌中，再将农杆菌转化至亚洲棉植株。

一种miR164a培育耐盐碱植物品种的方法，通过调控miR164a在植物中的表达量负调控植物耐盐碱的能力，所述植物为双子叶植物。

本发明的工作原理及有益效果为：

1、本发明提供了一种亚洲棉miRNA，即miR164a、以及其前体序列，通过调控该miRNA的表达量可用于调控目的植物应答盐胁迫的能力，表现为盐胁迫下48小时后所述转基因植物的叶片出现萎蔫，且相对电导率高于野生型植株，可见利用亚洲棉miRNA进行作物的遗传转化可培育耐盐作物，进而可提高农作物产量，本发明为调控目的植物应答盐胁迫的能力提供了一种新的途径，在农业领域具有广阔的应用空间和市场前景。