[发明专利]一种FaPEx-TD-ESI-MS/MS快速检测肉类中瘦肉精的方法

说明书

本发明提供了一种FaPEx‑TD‑ESI‑MS/MS快速检测肉类中瘦肉精的方法，首先对肉类样品进行前处理：称取肉类样品，加入盐酸溶液震荡，然后加入醋酸乙腈溶液震荡，再离心，萃取液于FaVEx快速过滤柱中过滤，移取过滤液氮吹至近干，定容后，形成样品溶液；由样品溶液与对照品溶液是否具有相同的分子离子峰和碎片离子峰，以及待测物的碎片离子丰度比与对照品溶液的离子丰度比是否一致，判断样品中是否存在对照品中的化合物，即样品中是否含有瘦肉精。本发明将FaVEx快速过滤柱和TD‑ESI‑MS/MS技术有效结合，且有效地缩短了前处理时间，有机试剂用量少，对环境污染小，具有快速、准确、简便、耐用和低成本的优势。

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种FaPEx-TD-ESI-MS/MS快速检测肉类中瘦肉精的方法。

背景技术

“瘦肉精”是指具有相似结构的β-受体激动剂，临床上用于治疗哮喘、休克等疾病。该类药物能够促进动物生长，并显著提高瘦肉率，为了迎合消费需求，常被非法添加在畜禽肉中。为此，农业部235号公告明确规定，动物源性食品中不得检出β-受体激动剂。热解吸-电喷雾-原位质谱仪(TD-ESI-MS/MS)是目前比较先进的质谱技术之一，其优势在于使用探针取样直接检测，不受样品状态影响，没有记忆效应，操作时只通过简单的金属探针接触固体表面或液体样品采集待测物，以高温加热的方式完成探针表面吸附物质的解吸过程，解吸后的气相物质分子经载气流轨道收束并吹送至电喷雾区域，完成离子化过程，最终进入三重四极杆质谱检测器分析，适用于现场的快速筛查。该方法现已应用于食品质量安全检测、果蔬中农药残留、保健食品非法添加物等方面的研究，但在畜禽肉中兽药残留的应用未见相关报道。

目前检测β-受体激动剂最常用的方法有免疫分析法和仪器分析法。免疫分析法最常用的有酶联免疫法和胶体金免疫层析法，酶联免疫法的原理是待测样品中的β-受体激动剂类药物残留与微孔包被的抗原共同竞争特异性抗体；胶体金免疫层析法是一种利用胶体金颗粒作为标记物简单快速的免疫分析方法，其最关键的是制备出特异性强和纯度高的单克隆抗体，使用原理是将人工合成的抗原先固定于条状纤维层析材料的试纸条上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，样品溶液借助毛细作用在试纸条上移动，待测物与人工合成的抗原竞争结合胶体金标记的抗体，并直接以颜色显示检测结果；胶体金免疫层析法目前主要用在液体样品检测中，在肉制品中应用不多，其灵敏度和准确度不及酶联免疫法。仪器分析法最常用的有气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)，色谱质谱技术联用，可以对待测物进行有效的分离，是一种高灵敏度、高准确性的检测方法。

胶体金免疫层析法适用于大量样品的快速筛查，但是检测结果受环境和人为因素影响而存在差异，并且无法定量分析；酶联免疫法专一性和重现性无法得到有效保障，假阳性较多；虽然免疫法操作简单、使用成本不高，在检测中能快速测量大批量样品，但免疫学存在交叉反应现象仍然是制约其应用的主要问题，而且受厂家生产试剂质量影响，有可能抗体批次不同，测定结果也会出现差异；另外在同类药物多残留检测方法方面也有其不能所及之处，不能用于国家相关执法仲裁检验。胶体金免疫层析法、酶联免疫法均为快速检测方法，适用于前端的快速筛查，其定性分析的准确度和定量分析的灵敏度均不及GC-MS和LC-MS法。

GC-MS和LC-MS法以其较高的灵敏度和专属性作为最常用的国标检测方法，GC-MS需要对样品进行衍生，衍生耗时长且过程不易控制，造成衍生程度不同，进而影响定量准确性；因而目前国标主流的检测方法为LC-MS，以两种国标为例分析，GB/T 21313-2007《动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法》样品需要经过双柱净化、同时用基质加标配置标准曲线，整个实验过程繁琐，增加试剂消耗以及人力消耗，人员操作差异大，实验平行性难以得到有效保证；GB/T22286-2008《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》需要两次调节pH，用MCX阳离子交换柱净化，内标法校正，固相萃取法一般经过活化、上样、淋洗、洗脱等过程，提取溶剂异丙醇：乙酸乙酯的＝6：4(v/v)不易挥发，增加了实验耗时和溶剂消耗。