[发明专利]利用质谱多重反应监测技术检测5、7、55型腺病毒方法

说明书

本发明为一种利用质谱多重反应监测技术检测5、7、55型腺病毒方法，其具体步骤包括：将腺病毒5型、7型、55型六邻体蛋白特异性肽段基因进行合成；进行标记肽段混合试剂的制备；确定诊断标志物的离子峰值；步骤进行试剂盒的配制；进行样本的检测。本发明为腺病毒型、7型、55型感染早期的预警和诊断提供了一个新的标记物，具有重要的临床价值。利用质谱结果，证实腺病毒感染前期患者血清样本中出现与预先设定的腺病毒5型、7型、55型六邻体蛋白标志性肽段中标及重标一致的质谱离子峰。SILAC标记的中标及重标腺病毒5型、7型、55型六邻体蛋白标准混合试剂可作为腺病毒型、7型、55型感染早期预警及诊断标志物结果准确。

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及利用质谱多重反应监测技术检测5、7、55型腺病毒方法。

背景技术

腺病毒(adenovirus)是一种无包膜的直径为70～90nm的颗粒，由252个微粒呈二十面体排列构成。其中，由240个非顶点壳粒构成的六邻体(hexon，120kD)是腺病毒衣壳的主要抗原性蛋白，每个六邻体由3个亚基组成，含有大量特异性抗原表位及中和表位，能够刺激机体产生型特异性中和抗体，也是诊断不同血清型的标准。特定血清型与疾病的严重程度、临床表现密切相关，所以腺病毒的检测分型较为重要。目前，已知能感染人体的腺病毒(HAdv)有67个不同的血清型，其中最常见的致病型为1－8型。55型腺病毒是由人11型和14型腺病毒重组产生的新型病毒，属于B组B2亚组，2006年在陕西首次出现，造成1名患儿死亡。

腺病毒感染时主要侵犯呼吸道黏膜，但也可感染消化道黏膜、眼结膜、泌尿道、心肌和淋巴结。主表现为急性上呼吸道感染(HAdv 1-5、HAdv 7、HAdv 14、HAdv 55)，其次为眼部(HAdv 8、HAdv 19、HAdv 37、HAdv 54)和胃肠道(HAdv 40、HAdv 41)感染等。呼吸道感染的腺病毒多发于冬春季节，人群普遍易感，多见于儿童。约半数患者为隐性感染。免疫功能正常的感染者一般愈后良好，2周内症状缓解或消失，统计数据显示，中国健康人群的血清中多种腺病毒抗体阳性率极高，如HAdv 3为80％、HAdv 4为60％、HAdv 5为80％、HAdv 7为60％等，可见腺病毒感染的普遍性。易感人群感染后发生急性呼吸窘迫综合征、失明、肾衰竭等严重疾病甚至死亡的风险更高，基层医院易忽略儿童呼吸道感染者病原检测而经验性使用抗生素治疗，常有延误病情的可能。

腺病毒肺炎约占儿童期肺炎的10％，多由腺病毒3、7型引起，病情重，病死率高。近些年，由55、7和14型腺病毒感染引起的急性呼吸道疾病(acute respiratory diseases，ARD)常在军队的新兵中流行，这一综合征以咳嗽、发热和全身不适为特点，多因压力过大、劳累、聚集等原因所致。研究统计表明，新兵腺病毒感染率通常超过50％，其中20％ˉ40％发展为肺炎且须住院治疗。

《腺病毒感染诊疗指南》中指出腺病毒感染诊断标准为：①发病前8d内与腺病毒感染病例密切接触；②发热伴咽干或咽痛，干咳；③双侧或单侧颈部淋巴结肿大，绿豆或黄豆大小；④咽部充血，咽后壁淋巴滤泡增生，扁桃体表面覆有点、片状灰白色分泌物；⑤双肺听诊基本无干湿啰音，与影像学表现不一致；⑥外周血白细胞正常、升高或降低，分类淋巴细胞比例降低，单核细胞比例升高；⑦胸部影像学表现为结节状、斑片状、小片或大片状实变影，部分出现胸腔积液。符合以上①②③④⑥条者，临床诊断为腺病毒急性上呼吸道感染；全部符合者诊断腺病毒肺炎。确诊病例需临床诊断病例同时具备以下一种或几种实验室检查结果者：①咽拭子实时定量PCR(real-time PCR)法检测腺病毒特异性核酸阳性；②血清腺病毒特异性IgM抗体阳性；③急性期与恢复期双份血清标本腺病毒特异性IgG抗体4倍以上升高。并且由于腺病毒感染的临床表现与其他多种病原体引起的呼吸道感染性疾病类似，需要结合病原学检测阳性，排除能够引起类似临床表现的其他疾病，方可确定诊断。