[发明专利]西瓜黄瓜绿斑驳花叶病毒病抗性鉴定SNP分子标记及其用途

说明书

本发明公开了一种基于抗黄瓜绿斑驳花叶病毒病连锁的单核苷酸多态性(SNP)开发的分子标记，用于黄瓜绿斑驳花叶病毒病抗性鉴定，以西瓜为物种，分子标记引物CGMMVR包括等位引物1、等位引物2和通用引物。该分子标记能用于鉴定西瓜抗黄瓜绿斑驳花叶病毒病种质及其杂交或回交后代的辅助选择育种。

技术领域

本发明属于蔬菜抗病分子标记开发和分子标记辅助育种技术领域，具体涉及一种西瓜抗黄瓜绿斑驳花叶病毒分子标记开发及其应用，

背景技术

黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle Mosaic virus,CGMMV)是一种正单链RNA病毒，形状为直杆状，属烟草花叶病毒属(Tobamovirus)，于1935年第一次在英国报道(Ainsworth,1935)。主要侵染葫芦科作物，如西瓜、甜瓜、黄瓜、南瓜、瓠瓜等，还会侵染蔓陀罗、苋色藜、本生烟和普通烟等，不同株系的CGMMV在不同寄主植物上表现的症状不同，西瓜株系CGMMV可引起西瓜花叶、斑驳、叶片突起、植株矮化和果实倒瓤等症状。CGMMV的适应性和抗逆性极强，常温下可以存活数月，低温条件下可以存活数年，在土壤里能至少保持十个月的侵染力(Varveri et al.,2002)。其传播途径一般为种子传播、土壤传播、接触摩擦传播、人工嫁接、授粉、农事操作等，现也有报道称烟蚜可能传播黄瓜绿斑驳花叶病毒(洪璠璠等,2018)。目前CGMMV的防治主要方法有加强检验检疫工作、种子消毒处理、苗木嫁接、分子育种以及生物化学防治等(杨柳等,2018)。

为了探究CGMMV侵染西瓜早期的发病机理，有学者对CGMMV侵染24h后的西瓜叶片和受到CGMMV侵染的西瓜果实进行了转录组分析，以未接种病毒的健康植株作为对照，通过Gene Ontology(GO)分析、Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)通路富集分析得到了许多有表达差异的基因，主要将这些有表达差异的基因归类于光合作用、植物-病原体互作、次生代谢物、植物激素信号转导、CGMMV侵染后应激反应，为研究CGMMV发病机理提供了新思路(Li et al.,2017；Sun et al.,2019)。

西瓜野生品种‘P.I.595203’被证实对小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellowmosaic virus,ZYMV)、番木瓜环斑病毒西瓜株系(Papaya ringspot virus watermelonstrain,PRSV-W)和西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)均具有抗性，其中‘P.I.595203’对ZYMV-CH的抗性由隐性单基因zym-CH控制，对WMV的抗性至少由3个以上的隐性基因控制，这2种病毒的抗病基因相对独立P.I.595203对PRSV-W的抗性也是由隐性单基因prs-W控制(Xu et al.,2004)。本实验室前期研究表明P.I.595203对CGMMV表现为抗性，其抗性性状由一个以上隐性基因控制的(刘洁，2019)，但没有确定到具体的抗病基因。由于国内外对抗黄瓜绿斑驳花叶病毒的种质鉴定、抗性遗传规律、抗性基因连锁分子标记等方面的研究尚少，影响西瓜抗黄瓜绿斑驳花叶病毒病的高通量筛选鉴定。

上文中涉及的参考文献如下：

Li,X.,An,M.,Xia,Z.,Bai,X.,Wu,Y.Transcriptome analysis of watermelon(Citrullus lanatus)fruits in response to Cucumber green mottle mosaic virus(CGMMV)infection.Scientific Reports,2017,7(1).

Sun,Y.,Fan,M.,He,Y.Transcriptome Analysis of Watermelon LeavesReveals Candidate Genes Responsive to Cucumber green mottle mosaic virusInfection.International Journal of Molecular Sciences,2019,20(3):610.