[发明专利]一种腮腺炎减毒活疫苗病毒的浓缩保藏方法

权利要求书

1.一种腮腺炎减毒活疫苗病毒的浓缩保藏方法，其特征在于，步骤包括：

1)制备细胞悬液：将孵化种蛋弃去鸡胚头和内脏，将其余组织制备成细胞悬液；

2)单层细胞的制备：将细胞悬液，置于适宜温度下培养，培养成致密单层细胞；

3)病毒液的制备：待细胞长成致密单层后，弃去细胞营养液换上病毒生长液，接种病毒，调至合适的pH、温度恒温培养；感染40-56小时后弃去病毒生长液，去除牛血清白蛋白，去除后，换上不含牛血清白蛋白的病毒维持液，调至合适的pH、温度恒温培养，当融合性病变达到75％以上时，收获病毒液；

4)超滤浓缩：选择孔径大小为100-300KD的超滤膜包对病毒液进行10-50倍浓缩，得病毒浓缩液；

5)原液配制：将冻干保护剂与病毒浓缩液按1：4-1：6体积比混合，即为原液；

6)冻存：将配制好的原液于-60℃以下冻存；

步骤5)中，所述冻干保护剂包括：终浓度为5％的乳糖、终浓度为2％的山梨醇和终浓度为0.5％的谷氨酸钠；

步骤1)中，将其余组织制备成细胞悬液的方法为：使用0.75‰胰蛋白酶溶液对组织进行消化，弃去消化液，吹打至糊状，加入细胞营养液，静置后，上部的细胞营养液，即为细胞悬液；

步骤2)中，单层细胞的制备方法为：用细胞营养液将细胞悬液稀释到细胞浓度为2×105个/ml，分装于细胞工厂中，每层细胞工厂加细胞悬液200ml，置于36.5±0.5℃恒温室培养，培养至细胞长成致密单层细胞；

步骤3)中，待细胞长成致密单层后，弃去细胞营养液换上病毒生长液，接种病毒，pH调制7.2-7.4，33.0±0.5℃恒温培养；感染40-56小时后弃去病毒生长液，去除牛血清白蛋白，去除后，换上不含牛血清白蛋白的病毒维持液，pH调制7.4-7.6，33±0.5℃恒温培养，当融合性病变达到75％以上时，收获病毒液；

步骤3)中，按MOI0.001～0.01接种病毒；

步骤3)中，去除牛血清白蛋白的方法为用0.8％的盐水洗涤细胞表面以去除牛血清白蛋白；

步骤3)中，通过加入碳酸氢钠调节pH；

步骤4)中，选择使用100～300KD膜包对病毒液进行浓缩，浓缩10～20倍。

2.如权利要求1所述一种腮腺炎减毒活疫苗病毒的浓缩保藏方法，其特征在于，步骤4)中，选择使用100KD膜包对病毒液进行浓缩，浓缩20倍。