[发明专利]一种提高β-环糊精得率的制备方法

权利要求书

1.一种提高β-环糊精得率的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)、固定化环糊精葡萄糖基转移酶及固定化环糊精葡萄糖基转移酶产生菌制备:

用乙醇溶液溶解Eudragit S-100，Eudragit S-100浓度为15～30g/L，按体积比1:4的比例，加入含有50～70U/mL的环糊精葡萄糖基转移酶和5～10cfu/mL环糊精葡萄糖基转移酶产生菌，混合均匀，在25～35℃、PH6.0～8.0的条件下，温育1～3h；温育后，用PH调节剂调节溶液pH＜6.0，静置得悬浮液，6000r/min离心30分钟，过滤得到固体微球：加入乙醇溶液洗涤微球，悬浮液再6000r/min离心30分钟，洗涤过程重复三次，得到固定化环糊精葡萄糖基转移酶及固定化环糊精葡萄糖基转移酶产生菌，置于4℃保存备用；

2)制备β-环糊精：

淀粉与蒸馏水混合进行淀粉调浆，得到淀粉浓度为20％～30％的淀粉乳，进行预处理后，用氨水调节PH为6.0～8.0，加入步骤1)制备的固定化环糊精葡萄糖基转移酶及固定化环糊精葡萄糖基转移酶产生菌，得到反应液，控制反应液温度为30℃，反应10～20h；反应后，加入PH调节剂调节溶液pH＜6.0，静置的悬浮液，6000r/min离心30分钟，过滤得到固体微球：加入乙醇溶液洗涤微球，悬浮液再6000r/min离心30分钟，洗涤过程重复三次，得到回收的固定化环糊精葡萄糖基转移酶，置于4℃保存备用；上清液经分离纯化得到β-环糊精。

2.如权利要求1所述的提高β-环糊精得率的制备方法，其特征在于，所述环糊精葡萄糖基转移酶产生菌包括熊艳军、宿玲恰、王蕾、吴敬及陈晟等人的“环糊精葡萄糖转移酶的酿酒酵母表面展示及其生产2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗坏血酸”中公开的重组酿酒酵母EBY100-pYD1-cgt。

3.如权利要求1所述的提高β-环糊精得率的制备方法，其特征在于，所述PH调节剂为硝酸弱碱盐或强酸铵盐。

4.如权利要求3所述的提高β-环糊精得率的制备方法，其特征在于，所述PH调节剂为硝酸铵。

5.如权利要求1所述的提高β-环糊精得率的制备方法，其特征在于，所述预处理为在80～100℃下搅拌20～30min。

6.如权利要求1所述的提高β-环糊精得率的制备方法，其特征在于，所述步骤2)加入的固定化环糊精葡萄糖基转移酶的添加量为1～5U/g干淀粉，固定化环糊精葡萄糖基转移酶产生菌浓度为3～10cfu/mL。

7.如权利要求1所述的提高β-环糊精得率的制备方法，其特征在于，所述分离纯化包括将上清液三次依次经过冷却结晶、溶解水洗及离心分离得到β-环糊精一和三次的离心液，将三次的离心液混合进行5倍浓缩，结晶离心后再三次依次经过冷却结晶、溶解水洗及离心分离得到β-环糊精二，将β-环糊精一和β-环糊精二混合、干燥及粉碎得到成品β-环糊精。