[发明专利]氨基末端脑钠肽前体多肽、偶联蛋白

说明书

本发明公开了一种氨基末端脑钠肽前体多肽，所述氨基末端脑钠肽前体多肽通过在天然氨基末端脑钠肽前体的特定氨基酸序列的氨基末端附近和羧基末端附近分别添加第一半胱氨酸和第二半胱氨酸形成，所述特定氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示多肽序列，所述氨基末端附近为所述特定氨基酸序列的氨基末端的1～3个氨基酸，所述羧基末端附近为所述特定氨基酸序列的羧基末端的1～3个氨基酸，所述第一半胱氨酸和所述第二半胱氨酸能够形成二硫键，从而使得所述氨基末端脑钠肽前体多肽能够形成环状多肽。本发明还公开一种偶联蛋白。

本申请是申请日为2019年05月14日、申请号为201910398843.4、专利名称为氨基末端脑钠肽前体多肽、抗体及其制备方法、检测试剂盒及检测方法的分案申请。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种氨基末端脑钠肽前体多肽、偶联蛋白。

背景技术

氨基末端脑钠肽前体(简称为NT-proBNP)来自心室肌细胞，最初合成的为前脑钠肽原(pre-proBNP)，是由134个氨基酸组成的多肽链。前脑钠肽原在心肌细胞中裂解为脑钠肽前体(proBNP，108个氨基酸)和信号肽(26个氨基酸)。当心肌细胞受到刺激时，proBNP在活化酶的作用下裂解为由76个氨基酸组成的无活性的直线多肽NT-proBNP和32个氨基酸组成的活性环状多肽BNP，释放入血循环。NT-proBNP半衰期长(60-120min)，与BNP相比更容易被检测到，即检测的敏感性提高，NT-proBNP更容易反映早期或者轻微心脏功能的变化。NT-proBNP具有更低的个体差异，不受个体生理性节律的影响。因此，临床上将NT-proBNP作为心衰诊断及临床预后的生物标志物。

目前多采用免疫法检测样品中的NT-proBNP浓度，即通过NT-proBNP抗体与样品中的NT-proBNP特异性结合的性质检测NT-proBNP浓度。NT-proBNP抗体可以采用天然的NT-proBNP蛋白免疫动物制备，但天然NT-proBNP蛋白免疫动物产生的抗体，大多对糖基化位点敏感，导致检测结果假阴。采用线性多肽的免疫动物制备抗体可以避免糖基化位点的影响，但该方法制备的抗体与样品中天然的NT-proBNP的亲和力差，导致检测灵敏度低，检测结果不准确。

发明内容

基于此，有必要提供一种对NT-proBNP检测灵敏度高、检测结果准确的氨基末端脑钠肽前体多肽组合物、偶联蛋白。

一种氨基末端脑钠肽前体多肽，所述氨基末端脑钠肽前体多肽通过在天然氨基末端脑钠肽前体的特定氨基酸序列的氨基末端附近和羧基末端附近分别添加第一半胱氨酸和第二半胱氨酸形成，所述特定氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示多肽序列，所述氨基末端附近为所述特定氨基酸序列的氨基末端的1～3个氨基酸，所述羧基末端附近为所述特定氨基酸序列的羧基末端的1～3个氨基酸，所述第一半胱氨酸和所述第二半胱氨酸能够形成二硫键，从而使得所述氨基末端脑钠肽前体多肽能够形成环状多肽。

在其中一个实施例中，所述氨基末端脑钠肽前体多肽为如SEQ ID NO.8所示多肽。

一种偶联蛋白，包括所述的氨基末端脑钠肽前体多肽，还包括与所述氨基末端脑钠肽前体多肽偶联的载体蛋白。

在其中一个实施例中，所述氨基末端脑钠肽前体多肽具有自由羧基或者可羧化的基团。

在其中一个实施例中，所述氨基末端脑钠肽前体多肽与所述载体蛋白的偶联方法选自混合酸酐法和碳二亚胺法中的一种。

在其中一个实施例中，所述氨基末端脑钠肽前体多肽具有自由氨基或者可还原硝基。

在其中一个实施例中，所述氨基末端脑钠肽前体多肽与所述载体蛋白的偶联方法选自选自戊二醛法和重氮化法中的一种。

在其中一个实施例中，所述氨基末端脑钠肽前体多肽具有自由羟基。