[发明专利]一种临床血性胸水细胞蜡块及其制备方法

说明书

本发明公开了一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，包括取血性胸水离心获得沉淀物；往沉淀物加入红细胞裂解液，混匀后静止获得红色透明胶体状液体，红细胞裂解液由氯化铵，碳酸氢钠和乙二胺四乙酸二钠组成；经过二次离心至沉淀表面变浅或无红色沉淀产生，获得第二沉淀物；加入乙醇溶液，混匀后静止使沉淀成团，再离心获得第三沉淀物；加入海藻酸钠溶液，搅拌混匀，离心后加入氯化钙溶液，直至细胞团凝结成凝胶块，取出凝胶块包裹并脱水处理后，用石蜡包埋沉淀物获得细胞蜡块。本方法制备的细胞蜡块经HE染色显示无红细胞残留，癌细胞无变形，核质染色红蓝分明，核膜核仁清晰，核内染色均质状，癌细胞团形态保存好，可见腺样结构排列，背景干净。

技术领域

本发明涉及医疗生物技术领域，尤其涉及一种临床血性胸水细胞蜡块及其制备方法。

背景技术

临床细胞病理工作中，常规的胸水涂片因制作简单可快速进行临床诊断，利用细胞蜡块进行免疫组织化学及分子生物学方法鉴别使细胞病理诊断更加精准化。然而细胞蜡块的制作要求严格，尤其是临床血性胸水，如果标本前期血细胞处理不好，制成的细胞蜡块含红细胞过多，肿瘤细胞占比低数量少，不利于常规HE染色病理诊断；红细胞同时也将导致免疫组织化学染色背景过高造成判读困难；切片肿瘤细胞含量少，所提取的DNA浓度低，不利分子病理诊断。

现有的标本处理所用红细胞裂解液一般为15-50％乙醇溶液、1-3％乙酸溶液或前两者不同比例的混合，如专利CN201711341745.4公开了一种基于血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法及细胞蜡块，将血性细胞样本清洗后，离心收集第一沉淀样本，加入第二固定液，混合均匀后二次离心得第二沉淀，将第二沉淀脱水透明、浸蜡以及包埋。其中固定液为乙醇乙酸液，乙醇乙酸液由体积分数为24-25.5％的乙醇与乙酸按照体积比为18-19：1混合而得。但实际使用中发现该裂解液在裂解红细胞的同时可使部分红细胞膜表面蛋白质变性，使得红细胞凝结成褐色凝块，残留在细胞沉淀中。因此存在红细胞裂解不彻底，将造成免疫组织化学染色非特异性着色，肿瘤细胞比例少，从而影响结果判读。另外由于红细胞裂解较彻底，沉淀物量较少，剩余有核细胞浓度高，不易凝结成团且易碎，用工具挖取难度大大增加，而利用传统方法如琼脂法或明胶法，其操作繁琐且过程需要加温，造成细胞损伤；鸡蛋清法其原材料不易保存，且其含有的蛋白成分会影响免疫组织化学的染色。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，解决了现有制备方法在裂解红细胞时容易引起细胞膜表面蛋白质变性，使得红细胞凝结成褐色凝块且沉淀不易提取，从而影响结果判读的问题。

本发明采用的技术手段如下：一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S101：取血性胸水标本，第一次离心获得第一次沉淀物；

S102：往第一次沉淀物加入红细胞裂解液，混匀后静止获得红色透明胶体状液体，所述红细胞裂解液由氯化铵，碳酸氢钠和乙二胺四乙酸二钠组成；

S103：经过第二次离心至沉淀表面变浅或无红色沉淀产生，若有较多红色沉淀可重复S102直至无红色沉淀即可，获得第二次沉淀物；

S104：往第二次沉淀物加入乙醇溶液，充分混匀后静止使细胞沉淀成团，第三次离心获得第三沉淀物；

S105：往第三沉淀物加入海藻酸钠溶液，搅拌混匀，第四次离心后缓慢加入氯化钙水溶液，直至细胞团凝结成凝胶块，将凝胶块取出脱水、浸蜡及包埋获得细胞蜡块。

优选地，红细胞裂解液由8g氯化铵，0.84g碳酸氢钠和0.37g乙二胺四乙酸二钠，加水至1000mL定容获得。

优选地，海藻酸钠水溶液由0.5g海藻酸钠和50mL蒸馏水，加入离心管在60℃水浴过夜至完全溶解获得。

优选地，氯化钙水溶液通过称取5.5g氯化钙和50mL蒸馏水配置获得。