[发明专利]一种促进骨髓间充质干细胞体外增殖的方法在审
| 申请号： | 202010974672.8 | 申请日： | 2020-09-16 |
| 公开（公告）号： | CN112011506A | 公开（公告）日： | 2020-12-01 |
| 发明（设计）人： | 霍亚如;黄金刚 | 申请（专利权）人： | 郑州佐爵生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 郑州芝麻绘智知识产权代理事务所(普通合伙) 41191 | 代理人： | 李玲玲 |
| 地址： | 450000 河南省郑州市高新技术产业开发区国*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 促进 骨髓 间充质 干细胞 体外 增殖 方法 | ||
1.一种促进骨髓间充质干细胞体外增殖的方法，其特征在于，包括在骨髓间充质干细胞原代培养的基础培养基中添加猴菇多糖、接骨木黄酮、石榴多酚，以培养基的终体积计，所述猴菇多糖的添加浓度为20-35μg/mL，所述接骨木黄酮的添加浓度为50-70μg/mL，所述石榴多酚的添加浓度为65-80μg/mL。
2.根据权利要求1所述促进骨髓间充质干细胞体外增殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取分离人骨髓间充质干细胞，以1-2×104个/mL在基础培养基中接种后进行原代培养，所述基础培养基中加入猴菇多糖、接骨木黄酮、石榴多酚、胎牛血清，以培养基的终体积计，所述猴菇多糖的添加浓度为20-35μg/mL，所述接骨木黄酮的添加浓度为50-70μg/mL，所述石榴多酚的添加浓度为65-80μg/mL，所述胎牛血清的用量为培养基终体积的5-10％，在37℃、5％CO2的条件下培养，每2-3天更换培养基，至细胞融合度达到80％-85％，用胰酶消化传代；
(2)取上述步骤(1)中胰酶消化后的细胞以1-2×105个/mL接种于完全培养基中，进行传代培养，传代培养过程在37℃、5％CO2的条件下进行，每隔3d全量换培养液。
3.根据权利要求1所述促进骨髓间充质干细胞体外增殖的方法，其特征在于，所述传代培养的比例为1:3-4。
4.根据权利要求2所述促进骨髓间充质干细胞体外增殖的方法，其特征在于，所述基础培养基为DMEM/F12培养基。
5.根据权利要求2所述促进骨髓间充质干细胞体外增殖的方法，其特征在于，所述完全培养基包括基础培养基DMEM/F12、添加在基础培养基中的胎牛血清、所述胎牛血清的用量为完全培养基总体积的5-10％，以完全培养基的终体积计，所述基础培养基中还添加有胰岛素60-80ng/mL、人血清白蛋白40-50μg/mL、EGF10-20ng/mL、青霉素80-100U/mL，链霉素80-100U/mL。
6.根据权利要求2所述促进骨髓间充质干细胞体外增殖的方法，其特征在于，所述步骤(1)中采用浓度为0.25％的胰酶消化骨髓间充质干细胞。
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