[发明专利]一种犬脐带来源的间充质干细胞培养基和培养方法

说明书

本发明提供了一种犬脐带来源的间充质干细胞培养基和培养方法，所述培养基包含以下浓度的组分：10～20v/v％FBS、0.8～1.2mM丙酮酸钠、0.08～0.15mM甘氨酸、0.08～0.15mM L‑丙氨酸、0.08～0.15mM L‑天冬酰胺、0.08～0.15mM L‑天冬氨酸、0.08～0.15mM L‑谷氨酸、0.08～0.15mM L‑脯氨酸、0.08～0.15mM L‑丝氨酸、2～6mM谷氨酰胺。所述方法包括以下步骤：(1)采集新生犬脐带；(2)将步骤(1)获得的脐带进行清洗，剔除脐带动脉及静脉，剪碎；(3)使用消化液进行消化，获得脐带间充质干细胞；(4)使用上述培养基对步骤(3)获得的脐带间充质干细胞进行培养。上述培养方法可获得增殖能力和定向分化能力强的犬间充质干细胞，具有材料易得、操作简单和获得的间充质干细胞纯度高等优点。

技术领域

本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及一种犬脐带来源的间充质干细胞培养基和培养方法。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是干细胞家族的重要成员，存在于骨髓、脐带、脂肪、胎盘等多种组织中。MSCs具有高度增殖潜力和多向分化能力，在特定条件下，可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等多种细胞。MSCs来源广、分离培养操作简单、可以大量培养扩增，是干细胞治疗的理想种子细胞，具有广阔的临床应用前景。

脐带来源的间充干细胞材料易得，不会对动物造成伤害，避免了伦理道德争议。而犬在人们生活中扮演着多重角色，不仅是比较受欢迎的宠物，也可训练成为导盲犬等工作犬，还是重要的临床药物试验的动物模型。目前，犬类上常用的MSCs主要来源于骨髓和脂肪组织，但是通过这两种来源获取干细胞对动物会造成不同程度的伤害，而脐带虽然是动物生产时产生的废弃物，但也是MSCs的来源之一，因此脐带，以犬类脐带为材料制备脐带来源的MSCs将是以后理想的替代物。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种犬脐带来源的间充质干细胞培养基和培养方法，所述培养基和方法培养获得的间充质干细胞具有增殖能力强的优点，可定向诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞，且操作简单。

具体技术方案为：

一种间充质干细胞培养基，所述培养基包含以下浓度的组分：10～20v/v％FBS、0.8～1.2mM丙酮酸钠、0.08～0.15mM甘氨酸、0.08～0.15mM L-丙氨酸、0.08～0.15mM L-天冬酰胺、0.08～0.15mM L-天冬氨酸、0.08～0.15mM L-谷氨酸、0.08～0.15mM L-脯氨酸、0.08～0.15mM L-丝氨酸、2～6mM谷氨酰胺。

在其中一些实施例中，所述培养基包含以下浓度的组分：10～15v/v％FBS、0.9～1mM丙酮酸钠、0.1～0.12mM甘氨酸、0.1～0.12mM L-丙氨酸、0.1～0.12mM L-天冬酰胺、0.1～0.12mM L-天冬氨酸、0.1～0.12mM L-谷氨酸、0.1～0.12mM L-脯氨酸、0.1～0.12mM L-丝氨酸、2～4mM谷氨酰胺。

在其中一些实施例中，所述培养基包含以下浓度的组分：10v/v％FBS、1mM丙酮酸钠、0.1mM甘氨酸、0.1mM L-丙氨酸、0.1mM L-天冬酰胺、0.1mM L-天冬氨酸、0.1mM L-谷氨酸、0.1mM L-脯氨酸、0.1mM L-丝氨酸、2mM谷氨酰胺。

在其中一些实施例中，所述培养基中还含有抗生素。

在其中一些实施例中，所述培养基的溶剂为低糖DEME培养基。

所述低糖DEME培养基是指葡萄糖浓度为1000mg/L的DEME培养基。

本发明还提供了上述培养基在培养间充质干细胞中的用途。

本发明还提供了一种间充质干细胞的培养方法。

具体技术方案为：