[发明专利]HCV重组抗原及应用

说明书

本发明涉及HCV重组抗原及应用。本发明提供一种HCV重组抗原，其包含至少2个NS3抗原，至少1个NS4抗原，和至少1个核心抗原。本发明还提供一种编码所述HCV重组抗原的核酸，包含所述核酸的表达载体，包含所述表达载体的宿主细胞，包含所的HCV重组抗原的缀合物，和包含所述HCV重组抗原的试剂盒等。

技术领域

本发明涉及HCV检测领域。具体而言，本发明涉及HCV重组抗原，其可以用于检测来自受试者的样品中的HCV抗体的存在等。本发明还涉及编码所述的HCV重组抗原及其突变体的核酸以及相关的载体、宿主细胞、免疫测定法和检测试剂盒等。

背景技术

丙型病毒性肝炎，简称丙型肝炎或丙肝，是由丙型肝炎病毒(hepatits C virus，HCV)感染而引发的疾病，主要由血液或体液传播。据世界卫生组织估计，全球约有1.8亿人感染丙肝，全球HCV的感染率约为3％。在我国健康人群抗HCV阳性率为0.7％-3.1％，约3800万人。由于病毒生物学特点和宿主免疫功能等多方面因素，机体免疫往往难以有效清除病毒，导致约80％的HCV感染者发展为慢性肝炎，其中10％-20％将发展成肝硬化，肝硬化患者中每年有1％-5％发展成为肝细胞癌症，因此，慢性HCV感染的流行成为世界各国一项重要的社会经济负担。

HCV为单股正链RNA病毒，基因组全长约9.5kb可分为3个区域，即5’非编码区(5’UTR)、编码区(ORF)、3’非编码区(3’UTR)，其排列顺序为5′UTR-C-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4-NS5-3′UTR。5’UTR为高度保守区，是病毒翻译的起始位点，在HCV复制过程中有非常重要的作用。开放读码框架(ORF)包括结构蛋白区C、E1、E2和非结构蛋白区P7、NS2-NS5。包膜区(E1、E2)和核心区(C)编码病毒颗粒，非结构蛋白区在病毒复制和病毒蛋白合成中起重要作用。其中核衣壳蛋白(Core)和非结构蛋白部分的NS2、NS3、NS4A、NS5A和NS5B等是目前主要的免疫诊断研究的重要靶点。

HCV核心蛋白(core蛋白)位于HCV基因组的第342-914核苷酸位点，编码191个氨基酸，氨基酸序列十分保守。HCV core蛋白是一种具有多种生物学功能的病毒蛋白，除了具有组装病毒颗粒的功能外，还在HCV增殖及致病机制中起重要作用，是HCV感染的重要标志。HCV core蛋白在HCV感染后体内抗体阳转前即可产生，是患者体内HCV复制和HCV病毒载量的重要指标。由于高度保守且有很强的免疫原性，使得其在HCV诊断和疫苗的研究中应用广泛。NS3基因位于HCV全基因组序列第3300-5200核苷酸位点，编码含有630个氨基酸。NS3蛋白具有蛋白酶功能，其N端的189个氨基酸具有丝氨酸蛋白酶活性，C端的442个氨基酸具有核苷三磷酸酶(NTPase)和RNA解旋酶的活性。抗NS3抗体最早出现，NS3蛋白具有很强的抗原性，几乎所有的HCV感染者都会产生高滴度特异性的抗NS3抗体。NS4基因位于HCV全基因组的第4974-5133位核苷酸，编码两个蛋白NS4A和NS4B。NS4A为54个氨基酸的短肽，NS4B是一个27kDa大小的定位于ER膜的跨膜蛋白，具有很强的疏水性，NS4区含有至少两个免疫优势序列位点，抗原性强，绝大多数HCV感染者能产生针对该区的抗体。NS5基因编码区为全长3117个核苷酸，编码两个蛋白NS5A和NA5B，是HCV基因组中最长的编码区。

随着基因工程技术的发展，对HCV病毒基因的分子生物学研究日趋成熟，并且应用于诊断试剂。HCV诊断试剂在不同检测平台上的主要使用core，NS3，NS4等基因片段，在诊断试剂中HCV诊断原料多以单独HCV-core、单独NS3、core+NS3嵌合、NS3+core嵌合、NS3+NS4嵌合等模式。由于临床样本的多样性，以及不同区段抗体产生的时间以及量的不同，单一片段或者某两个片段的嵌合容易造成临床检测的漏检。

因此，本领域仍然需要能够避免临床检测的漏检和以高灵敏度和高特异性检测HCV的产品。

发明内容