[发明专利]一种LAMP法检测水产病原用内参质控引物组及其应用

说明书

本发明公开了一种LAMP法检测水产病原用内参质控引物组及其应用，属于水产病原检测试剂开发技术领域。本发明LAMP法检测水产病原用内参质控引物组根据SEQ ID No:1所示核酸序列或与其互补的碱基序列或其转录的RNA序列设计。本发明的内参质控引物组可用于鱼类、虾类、蟹类、参类等多种水产动物病原的检测，为多种水产动物病原检测体系的构建奠定基础。

技术领域

本发明属于水产病原检测试剂开发技术领域，具体涉及一种LAMP法检测水产病原用内参质控引物组及其应用。

背景技术

我国是世界上重要的水产品生产和出口大国之一，水产养殖业是农业经济的主要支柱产业。近年来，随着水产养殖业的发展，养殖规模的不断扩大，水产养殖病害的发生日益频繁，危害越来越严重，是制约整个水产养殖业发展的最重要的因素之一。据不完全统计，2002-2009年，我国水产养殖病害平均年损失达百亿元之巨，其中鱼类约占55％～77％，甲壳类约占11％～28％，贝类约占3％～16％。因此，做好水产病害的预防工作是现代水产养殖业中的重中之重。

水产病原的快速诊断，对水产养殖的良种选育，疾病预防、进出口检疫、水产品食品安全等方面具有重大意义。目前常用的水产病害的检测技术主要包括：目检、镜检、病原的分离鉴定、聚合酶链式反应、核酸杂交、限制性酶切、基因芯片、酶联免疫检测技术、免疫荧光技术；这些检测方法均存在依赖精密仪器、检测成本高、灵敏性和特异性差，操作程序繁琐，难以推广等缺点；而且常规的病原检测技术大都不适合养殖基层的现场快速检测。

LAMP技术是一种新的DNA扩增方法，该技术依赖于自动循环的链置换反应，在等温条件下，不到1h就能扩增出10⁹靶序列拷贝，具有特异、灵敏、快速、简便等特点，在水产病原检测上有较为广泛的应用前景。

由于LAMP反应易受检测试剂(例如反应酶失活)、扩增模板的核酸提取质量(例如提取的核酸被严重降解或因操作失误未将核酸提取出来)等因素的影响，因此，设置LAMP反应检测的内参质控显得尤为重要；目前，关于内参质控的报道多见于人类疾病检测，而关于水产病原检测的内参质控鲜有报道。而且现有的内参质控引物组多数只针对于同一种生物，适用于多种生物的内参质控引物组的报道较少。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种LAMP法检测水产病原用内参质控引物组及其应用，本发明的内参质控引物组可用于鱼类、虾类、蟹类、参类等多种水产动物病原的检测，为多种水产动物病原检测体系的构建奠定基础。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

SEQ ID No:1所示核酸序列在设计LAMP法检测水产病原用内参质控引物组中的应用。

一种LAMP法检测水产病原用内参质控引物组，根据SEQ ID No:1所示核酸序列或与其互补的碱基序列或其转录的RNA序列设计。

在上述方案的基础上，所述LAMP法检测水产病原用内参质控引物组的序列为：

F3：5’-CGGGGAATCAGGGTTCGA-3’；

B3：5’-GTGGAGCTGGAATTACCGC-3’；

FIP：5’-TTCGTCACTACCTCCCCGTGCCTGAGAAACGGCTACCACAT-3’；

BIP：5’-CGAACGGGGCCTCGCAATTGACTTGCCCTCCACTCGA-3’；

LF：5’-CGGGAGTGGGTAATTTGCGC-3’；

LB：5’-ACACTTTAAATCCTTGTACGAGGA-3’；

或

F3：5’-TTCTTAGACCGTCGCATGAC-3’；