[发明专利]检测分析活体细胞生命活动状态的修饰二聚体表面增强拉曼的方法

权利要求书

1.一种检测分析活体细胞生命活动状态的修饰二聚体表面增强拉曼的方法，其特征在于，包括：

(1)提供第一类纳米颗粒、第二类纳米颗粒和第三类纳米颗粒；

其中，所述第一类纳米颗粒是通过使用参与细胞生命活动的物质A修饰具有表面增强拉曼效应的纳米颗粒；

所述第二类纳米颗粒是通过使用参与所述细胞生命活动的物质B修饰具有表面增强拉曼效应的纳米颗粒；

所述第三类纳米颗粒是通过使用配体C和具有稳定表面增强拉曼信号的物质E修饰具有表面增强拉曼效应的纳米颗粒，所述配体C可与至少一种细胞器上的受体D结合；

(2)将所述第一类纳米颗粒、第二类纳米颗粒和第三类纳米颗粒导入待测细胞，所述物质A和物质B参与生命活动，在生命活动过程中所述物质A和物质B结合，使得第一类纳米颗粒和第二类纳米颗粒组成二聚体；

(3)采用拉曼光谱仪对所述待测细胞进行扫描，检测得到所述物质A和物质B拉曼特征峰同时存在的二聚体表面增强拉曼散射信号，确定所述生命活动在细胞中的发生位置，再以所述发生位置周围的所述物质E的拉曼光信号作为基准，确定所述二聚体表面增强拉曼光谱强度和峰位置，以确定所述待测细胞生命活动状态。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述物质A包括：单链脱氧核糖核酸、单链核糖核酸、脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸和/或蛋白质；

所述物质B包括：受体、辅助因子、转录因子、聚合酶、单链脱氧核糖核酸、单链核糖核酸、脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、氨基酸、抗原、脂质和/或糖；

所述纳米颗粒选自金纳米颗粒或银纳米颗粒；

所述配体C为一种配体或多种不同配体。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在修饰所述物质A、物质B、配体C、物质E之前，在所述纳米颗粒的表面进行表面修饰，所述表面修饰方法包括：表面覆盖修饰、化学修饰、外膜修饰和/或物理修饰。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，将所述纳米颗粒导入细胞的方式包括：细胞胞吞、吞噬、胞饮或受体介导的内吞。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)进一步包括：

(3-1)将所述细胞样品置于拉曼光谱仪检测装置之下，调节显微镜焦距至可清晰观察到细胞结构；

(3-2)使用激光激发细胞的拉曼光谱，测量得到某一点的光谱后，将光斑移动到另一位置，重复这一步骤，最终扫描得到整个细胞内的拉曼光谱；

(3-3)选取拉曼光谱信号最强的位置，作为所述物质A和物质B所参与的生命活动在细胞中的发生位置；

(3-4)测定所述发生位置附近的所述物质E的拉曼光谱信号；

(3-5)将所述物质E自身的拉曼光谱信号作为检测基准，确定所述物质A与物质B拉曼光谱信号的强度及峰位。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(3-2)中，所述激光的波长大于400nm，所述光斑移动方法包括使用扫描振镜改变光斑位置或者使用位移平台移动样品位置。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(3)进一步包括：

(3-6)向所述待测细胞施加不同刺激，重复步骤(3-2)至(3-5)，以分析不同刺激条件下细胞生命活动定向成像和变化。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(3-6)中，所述向细胞施加的不同刺激，包括下列至少之一：病毒刺激、因子刺激、相邻细胞刺激、抗体刺激、毒素刺激、抗原刺激、药物刺激、光刺激、热刺激、电刺激、磁刺激、机械力刺激。