[发明专利]利用MPP1基因评估绵羊卵母细胞体外培养体系的方法

说明书

本发明公开了利用MPP1基因评估绵羊卵母细胞体外培养体系的方法，选择绵羊X染色体的MPP1基因的启动子区域设计基因扩增引物，通过分子标记基因MPP1，建立起绵羊卵母细胞体外培养体系的评估方法，评估效率高，简单方便，对绵羊卵母细胞体外培养体系的优化以及卵母细胞培养体系的建立奠定基础，有效助推绵羊高质量繁育，具有极大的推广价值。

技术领域

本发明涉及生物工程及基因分子标记技术领域，具体为利用MPP1基因评估绵羊卵母细胞体外培养体系的方法。

背景技术

绵羊具有体格中等，生长速度快等特点，其全身都是宝，羊肉肉质细嫩，含有很高的蛋白质和丰富的维生素，常吃羊肉可益气补虚，促进血液循环，增强身体抵抗力。羊奶与牛奶相比，富含更多脂肪和蛋白质，是肾病病人理想的食品之一，也是体虚者的天然补品。羊毛是纺织工业的重要原料，它具有弹性好、吸湿性强、保暖性好等优点。另外，羊粪经过发酵是一种很好的有机肥，使用它做肥料，可以改善土质，是防止土地板结，经济价值好。随着人们生活水平的不断提高，人们需要具有不同特色和特点的绵羊品种来满足人们日益增长的物质需求。因此，培育提高满足人们不同需求的绵羊品种日益成为现代畜牧业发展的时代要求。绵羊品种的改良和培育，离不开绵羊卵母细胞为基础生殖发育的相关研究，目前，绵羊屠宰后遗弃的卵巢组织和流产胎羊体内的卵巢组织等都是优质的绵羊卵母细胞资源。因此，利用屠宰后遗弃的卵巢组织或流产的胎羊体内卵巢组织，建立起卵巢卵母细胞组织培养体系，能够为绵羊卵母细胞发生发育的相关研究提供大量的重要的实验材料。

随着科学技术的进步，现代细胞工程和分子工程技术能够极大地加快绵羊的品种改良和培育速度，因此寻找一种分子标记基因并探索出一种利用分子标记基因评估绵羊卵母细胞体外培养质量的方法，能够有效建立绵羊卵母细胞体外培养体系，并且实现对绵羊卵母细胞体外培养体系的优化，建立高效的绵羊卵母细胞培养体系，助推绵羊高质量繁育，对开发利用绵羊卵母细胞和快速提高绵羊繁育质量发挥重要作用。

发明内容

本发明的目的在于：提供利用MPP1基因评估绵羊卵母细胞体外培养体系的方法，以解决以上缺陷。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

利用MPP1基因评估绵羊卵母细胞体外培养体系的方法，所述MPP1基因，为绵羊X染色体的分子标记基因MPP1，所述MPP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

优选地，所述MPP1基因，具体为绵羊Chromosome X-NC_040278.1的MPP1基因。

优选地，选择绵羊X染色体的MPP1基因的启动子区域设计基因扩增引物。

优选地，包括以下步骤：

S1、绵羊卵巢组织DNA基因组的提取：取绵羊卵巢组织，打碎形成细胞悬液，并利用DNA提取试剂盒，制得绵羊卵巢组织DNA基因组；

S2、绵羊MPP1基因启动子的扩增：利用Vector NTI Advance11.5.1软件，对绵羊MPP1基因启动子扩增引物进行设计，经添加酶切位点、保护碱基后，进行引物合成，并采用PCR扩增，再采用琼脂糖凝胶电泳回收MPP1基因启动子序列，制得绵羊MPP1基因启动子序列，启动子序列测序后选择MPP1基因启动子扩增正确的序列；

S3、MPP1基因启动子pLV-mCherry重构载体的构建：分别用限制性内切酶Cla I和BamH I酶切绵羊MPP1基因启动子序列和pLV-mCherry载体，并采用琼脂糖凝胶电泳分别回收MPP1基因启动子序列和pLV-mCherry载体，用T4连接酶连接MPP1基因启动子序列和pLV-mCherry载体，构建MPP1基因启动mCherry表达的pLV-mCherry重构载体；并利用绵羊MPP1基因启动子鉴定引物对含上述重构载体的菌体进行PCR鉴定，以检测MPP1基因启动子pLV-mCherry重构载体构建是否正确；