[发明专利]一种泰拉霉素D的分离纯化方法

说明书

本发明提供了一种泰拉霉素D的分离纯化方法，采用高效液相色谱法，使用流动相对待分离物在色谱柱中进行洗脱，合格馏分减压蒸馏，萃取除盐后，取有机层减压浓缩至干即可，本发明在萃取之前对合格馏分进行处理，将合格馏分进行高压乳匀或超声粉碎，减小了粒径，调节pH，加入针剂用活性碳，搅拌，脱碳，然后通过滤膜过滤，提高了表观分布容积，更好的将馏分中的杂质分离出去，上述分离方法能够有效分离泰拉霉素在合成及降解过程中产生的杂质，生产批次稳定质量可靠，生产周期短，单次制备产量大，满足杂质质量控制需求，为泰拉霉素未知杂质的研究奠定了良好的基础。

技术领域

本发明属于抗生素分离提取领域，特别是涉及一种泰拉霉素D的分离纯化方法。

背景技术

泰拉霉素（Tulathromycin）是半合成大环内酯类抗生素，于2004年在美国和欧盟上市。该药主要用于牛和猪由敏感菌引起的呼吸系统感染性疾病及由牛莫拉氏菌引起传染性角膜结膜炎的防治，药效强于市场上广泛使用的大环内酯类抗生素泰乐菌素和替米考星，在畜禽生产中的使用前景广泛。

泰拉霉素是由异构体A、B（分子式 C41H79N3O12，分子量806.09）按9：1组成的十五元环大环内酯类抗生素，两种异构体可通过C11和C13之间的内酯键的形成和断裂进行转换。

为了确保动物源性食品的安全，须对动物专用药物质量进行严格控制，药物含量测定、未知杂质的结构鉴定和杂质限量是药物质量控制的有效方法，杂质分析是药物质量标准的重要内容。泰拉霉素由半合成过程生产，与合成药物相比可控性更低，因此杂质谱更为复杂且难以预测。

现有技术中对于泰拉霉素及相关物质的分离技术中，分离不彻底，反应不完全，得到的目标产物纯度低，无法满足结构鉴定以及动物药物质量控制的杂质定位要求。

同时，泰拉霉素D为泰拉霉素合成过程中关键杂质，制备其标准品并对其结构进行研究都是泰拉霉素在国内申报兽药所必须的，同时对其结构进行研究也可以分析出它是在生产过程中何时产生，可以更好的减少其含量，提高泰拉霉素纯度。

发明内容

本发明提供了一种泰拉霉素D的分离纯化方法，解决背景技术中提出的分离得到的目标产物纯度低，分离不彻底，反应不完全等问题，从而能够更好的分离出泰拉霉素杂质D，提高泰拉霉素的纯度。

本发明的技术方案如下：

一种泰拉霉素D的分离纯化方法，其工艺步骤为：

泰拉霉素D合成：TULA-4 30-40g，甲酸胺40-50g，异丙醇230-260ml，30-40g纯净水，升温至65-75℃，搅拌15-17小时，取样检测，原料残留0.90-1.0%，反应结束，开始处理；

反应液浓缩至干，加250-350g水，滴加10%NaOH溶液调节PH至8-9，加250-400ml二氯甲烷萃取，收集二氯甲烷层；水层再加入70-120ml二氯甲烷反萃，收集二氯甲烷层；合并两次二氯甲烷层加250-350g水洗，分层取二氯甲烷层浓缩至干，加150-250g丙酮代干一次；得泰拉霉素D粗品粉末，此时泰拉霉素D粗品中含有泰拉霉素A以及泰拉霉素D，将泰拉霉素D粗品粉末进行制备柱分离；

泰拉霉素D分离：

采用高效液相色谱法，将泰拉霉素D粗品粉末溶解，然后将作为分离材料的离子交换纤维中浸泡在溶解液中，静置50-80min，然后将溶解液滤出；将氨水加热至60-65℃，取氨水浸泡上述已吸附了泰拉霉素A以及泰拉霉素D的离子交换纤维80-160分钟，滤去氨水；加入甲酸丁酯，其量为离子交换纤维量的2-3.5倍，得到预处理后的待测物；

使用流动相对预处理后的待测物在色谱柱中进行洗脱，合格馏分减压蒸馏，萃取除盐后，取有机层减压浓缩至干，即得泰拉霉素D。