[发明专利]水凝胶和间充质干细胞的制备方法

说明书

本发明涉及一种水凝胶和间充质干细胞的制备方法。该间充质干细胞的制备方法包括以下步骤：将组织置于预置有水凝胶的培养容器中培养，组织位于水凝胶上，其中，制备水凝胶的原料包括：100份～400份的N‑异丙基丙烯酰胺、6份～8份的引发剂、6份～8份的交联剂、18份～54份的壳聚糖和1份～4份的抗菌剂，所述抗菌剂选自可溶性锌盐及可溶性银盐中的至少一种及将培养容器置于4℃～20℃条件下，以使从组织中爬出的间充质干细胞从水凝胶上脱附。上述充质干细胞的制备方法可以提高间充质干细胞的产量。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，特别是涉及一种水凝胶和间充质干细胞的制备方法。

背景技术

间充质干细胞(MSCs)是具有自我更新和分化能力的一类细胞，近年越来越多的研究证实其在多种疾病中具有治疗潜能。间充质干细胞有多种来源，例如脐带、骨髓、皮肤、外周血等组织，其中，围产期组织由于处于发育阶段早期，细胞活力更强，是理想的间充质干细胞来源。围产期组织的来源包括脐带和胎盘，人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)细胞纯度高，增殖和分泌活性强，免疫风险低，无需配型，是未来临床应用的理想种子细胞。

然而，传统间充质干细胞的制备方法制得的间充质干细胞的量少，不能满足市场需求。

发明内容

基于此，有必要提供一种能提高间充质干细胞的产量的间充质干细胞的制备方法。

一种间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：

将组织置于预置有水凝胶的培养容器中培养，所述组织位于所述水凝胶上，其中，制备所述水凝胶的原料包括：100份～400份的N-异丙基丙烯酰胺、6份～8份的引发剂、6份～8份的交联剂、18份～54份的壳聚糖和1份～4份的抗菌剂，所述抗菌剂选自可溶性锌盐及可溶性银盐中的至少一种，及将所述培养容器置于4℃～20℃条件下，以使从所述组织中爬出的间充质干细胞从所述水凝胶上脱附。

上述间充质干细胞的制备方法通过在预置有水凝胶的培养容器中培养组织，该水凝胶由N-异丙基丙烯酰胺单体形成的聚(N-异丙基丙烯酰胺)与壳聚糖和抗菌剂中的阳离子形成的复合结构，促进从细胞从组织中爬出，提高细胞的产量；并且该水凝胶为温度敏感型水凝胶，当温度低于其临界溶解温度时，贴覆于水凝胶上的细胞由于水凝胶的体积相变而脱附，从而避免分离从组织爬出的细胞时胰酶消化对细胞的损伤，减少分离过程中细胞的死亡，也在提高收获的细胞量的同时也提高了收获的细胞的活性，进而也能提高细胞的产量。

在其中一个实施例中，所述水凝胶的临界溶解温度为32℃～35℃。

在其中一个实施例中，所述可溶性锌盐选自氯化锌及硫酸锌中的至少一种；

及/或，所述可溶性银盐为硝酸银；

及/或，所述壳聚糖的分子量为30000～3000000；

及/或，所述引发剂选自过硫酸铵、偶氮二异丁腈、偶氮二异庚腈、偶氮二异丁酸二甲酯、偶氮二异丁基脒盐酸盐、过氧化氢、过硫酸钾及叔丁基过氧化氢中的至少一种；

及/或，所述交联剂选自N，N’-亚甲基双丙烯酰胺、丙烯酸及二丙烯酰胺中的至少一种。

在其中一个实施例中，制备所述水凝胶的原料还包括添加5份～10份的促进剂；

优选地，所述促进剂选自四甲基乙二胺、三氧化铁及二乙基硫脲中的至少一种。

一种间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：

将组织置于预置有水凝胶的培养容器中培养，所述组织位于所述水凝胶上，其中，制备所述水凝胶的原料包括：100份～400份的N-异丙基丙烯酰胺、6份～8份的引发剂、6份～8份的交联剂、18份～54份的壳聚糖和1份～4份的抗菌剂，所述抗菌剂选自可溶性锌盐及可溶性银盐中的至少一种，及