[发明专利]枯草芽孢杆菌、菌剂、筛选方法及应用

说明书

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌菌株，命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Ch9，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2020380。本发明还公开了该菌株制备的菌剂、筛选方法及应用。该菌株具有较强的产蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶的能力。该菌株可应用草鱼养殖中，在生长上，可以显著提高草鱼的特定生长率，降低饵料系数；减少因高脂日粮和嗜水气单胞菌感染造成的肝脏损伤，维持肝脏正常脂质代谢功能，减少脂质在肝脏中的累积。该菌株还能抑制嗜水气单胞菌对草鱼肠上皮细胞的黏附，减弱嗜水气单胞菌对细胞的损伤，并对嗜水气单胞菌造成的草鱼肠粘膜结构损伤具有保护作用。

技术领域

本发明涉及菌株培育技术领域，尤其涉及枯草芽孢杆菌、菌剂、筛选方法及应用。

背景技术

嗜水气单胞菌广泛存在于养殖水体中，是淡水鱼类养殖过程中的主要致病菌。其中，肠道是鱼类重要的感染途径，侵入鱼体的嗜水气单胞菌，可通过肠道进入血液循环，进而导致鱼体全身性感染。嗜水气单胞菌能够造成草鱼的肠道炎症及结构的破坏；还会造成鱼类抗氧化能力降低及脂质过氧化的发生。

使用抗生素能够有效地控制疾病的发生和蔓延，但是它干扰养殖环境中和水产动物肠道中有益微生物菌群的正常生长和繁殖，导致水产动物对病原微生物的易感性，更严重的是病原菌的耐药性增强。利用益生菌来调节动物体内的微生态平衡，恢复机体正常生理功能、防治病害、增进健康，正逐渐成为世界范围内的热潮，由于益生菌制品无毒，没有残留，也不会产生抗药性，所以用益生菌替代抗生素有着很好的前景。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一株枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Ch9，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2020380。

具体的，所述枯草芽孢杆菌Ch9的16S rDNA序列如SEQ ID No.1所示。

本发明还提供一种所述的枯草芽孢杆菌的筛选方法，包括以下步骤：

S1、从草鱼肠道中分离和纯化得到芽孢杆菌；

S2、将S1得到的芽孢杆菌经过胞外产酶筛选，筛选出具有胞外产酶能力的菌株，即为所述枯草芽孢杆菌Ch9。

所述酶包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶。

本发明还提供一种枯草芽孢杆菌菌剂，由所述的枯草芽孢杆菌菌株经活化、发酵培养制备得到。

本发明还提供所述的枯草芽孢杆菌或其菌剂在草鱼养殖上的应用。

本发明至少具有以下有益效果：

本发明菌株分离自健康的草鱼肠道，具有较强的产蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶的能力。将发明菌株应用到草鱼养殖中，在生长上，可以显著提高草鱼的特定生长率，降低饵料系数；减少因高脂日粮和嗜水气单胞菌感染造成的肝脏损伤，维持肝脏正常脂质代谢功能，减少脂质在肝脏中的累积。在免疫保护上，能抑制嗜水气单胞菌对草鱼肠上皮细胞的黏附，减弱嗜水气单胞菌对细胞的损伤，并对嗜水气单胞菌造成的肠粘膜结构损伤有一定的保护作用。

附图说明

图1为本发明实施例提供的枯草芽孢杆菌Ch9喂养草鱼后其肝脏的油红O染色图；注：400×倍放大比例，各组(对照组、Ah组、Ah+Bs组和Bs+Ah组)的第28d(A-D图)和第56d(E-H图)。

图2为本发明实施例提供的枯草芽孢杆菌Ch9喂养草鱼后其肝脏的脂质沉积的结果图；I图：用Image-Pro Plus 6.0软件统计的染色区域面积结果；J图：肝脏的脂肪含量；图中数值用平均值±标准误(n＝6)表示。不同的上标字母表示不同处理组间差异显著(P0.05)。*表示28d与56d之间有显著差异(P0.05)。