[发明专利]一种高效分离脂肪源前体细胞的方法及其应用在审
申请号: | 202010985932.1 | 申请日: | 2020-09-18 |
公开(公告)号: | CN112080462A | 公开(公告)日: | 2020-12-15 |
发明(设计)人: | 杨嘉 | 申请(专利权)人: | 昆明学院 |
主分类号: | C12N5/077 | 分类号: | C12N5/077;A61K35/35;A61P17/00;A61P39/00 |
代理公司: | 云南凌云律师事务所 53207 | 代理人: | 董建国 |
地址: | 650000 云南*** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 高效 分离 脂肪 体细胞 方法 及其 应用 | ||
1.一种高效分离脂肪源前体细胞的方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)从人体皮下获取 9mm 3~21mm3的脂肪组织块;
2)脂肪组织块用75%酒精冲洗1~2次,擦拭干净;
3)将脂肪组织块放入小烧杯中,用眼科剪反复剪切组织至似糊状;
4)少量基础培养液,送入CO 2培养箱内静置1~2天;
5)加入足够的基础培养液,培养4~6天,转移到干净的离心管中,取400g,离心10分钟;
弃上清,收集下层组织沉淀;
6)用PBS溶液轻缓漂洗组织沉淀物2~4次;
7)加入3-5ml的0.25%胰蛋白酶溶液于35~38℃条件下消化3~6min,加入基础培养液终止消化,离心10分钟;
8)弃上清,使用10倍沉淀体积的DMEMF/12培养液重悬沉淀组织,使用40微米的滤膜过滤;
9)重悬混匀上述过滤液,使用10~20微米的滤膜再一次进行过滤;
10)离心上述步骤9)的组织过滤液,5~7分钟,收集离心后的沉淀物,使用细胞培养液吹散重悬细胞。
2.一种利用如权利1所述的高效分离脂肪源前体细胞方法所获得的脂肪源前体细胞,其特征在于,该脂肪源前体细胞可用于组织修复。
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