[发明专利]一种核壳型核酸固载微球的制备方法有效
申请号: | 202010986795.3 | 申请日: | 2020-09-18 |
公开(公告)号: | CN112280827B | 公开(公告)日: | 2022-12-06 |
发明(设计)人: | 石磊;刘海涛;段海峰;陈子天 | 申请(专利权)人: | 赛纳生物科技(北京)有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6806 | 分类号: | C12Q1/6806;C08F220/56;C08F220/60 |
代理公司: | 北京嘉途睿知识产权代理事务所(普通合伙) 11793 | 代理人: | 彭成 |
地址: | 100176 北京市大兴*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 核壳型 核酸 固载微球 制备 方法 | ||
本发明提供一种核壳型核酸固载微球的制备方法,可以有效固载核酸分子。本发明所述的核酸固载微球单一性好,有利于基因测序等方面的应用。通过在微球表面连接引发剂或碳碳双键;然后在水相中把微球通过聚合反应,在表面连接包含点击化学官能团的聚合物链,叠氮基团;再通过点击化学固载核酸分子。步骤简单,可以应用于常见的测序仪。
技术领域
本发明涉及一种核壳型核酸固载微球的制备方法,可以有效固载核酸分子,属于基因测序领域。
背景技术
生物活性负载性微球(Microsphere)为粒径在50nm~2mm之间的球形颗粒,带有反应性基团如-NH 2,-COOH,-SH等。微球由于具有较小的尺寸而致使其具有明显的表面效应如材料的亲和性好、生物相容性好、以及在生物体内易吸收、易游走等特性,已广泛的应用于细胞学、免疫学、微生物学、分子生物学以及临床诊断与治疗以及高通量基因检测等众多领域。
在微球用于高通量基因检测分析某些核酸序列的方法中,依赖于微球的尺寸分布在1μm左右、高度均匀分散以及微球对于核酸链的负载量。然后,可通过本领域公知的许多不同的方法来确定负载的核酸链的序列。
在某些微球用于核酸测序方法中,程序包括用待测序的核酸样本通过领域内公知的许多方法与微球相应的反应基团快速高效结合,实现负载;将负载核酸的微球引入流动池的通道中,并进入相应的反应微坑道,孵育固定的时间,产生始终能够支持扩增和测序在内的所有下游化学处理步骤。相比于其他类型的核酸负载体方法,如芯片涂覆负载性包被,核酸负载性微球具有更好的可控性,核酸负载量大等优势。
本发明提供一种核酸固载微球的制备方法,可以有效固载核酸分子。本发明所述的核酸固载微球单一性好,有利于基因测序等方面的应用。
发明内容
本发明提供一种核壳型核酸固载微球的制备方法,其特征在于包括以下步骤,
(1)在氨基聚苯乙烯微球的表面通过反应连接上第一活性基团,其中所述第一活性基团的结构为羰基α位置有碳碳双键的基团,或者羰基α位置有卤素的基团,优选溴,或者偶氮基团;
(2)在水相中,将步骤1获得的连接有第一活性基团的微球与丙烯酰胺类化合物反应,生成含有叠氮基团的微球;其中所述的丙烯酰胺类化合物指的是至少部分丙烯酰胺类化合物上含有叠氮基团;
(3)将步骤2获得的含有叠氮基团的微球与带有炔基的核酸分子反应,获得固载核酸分子的微球。
根据优选的实施方式,步骤2中,所述丙烯酰胺类化合物指的是丙烯酰胺与带有叠氮基团的丙烯酰胺混合物。
根据优选的实施方式,所述步骤2中丙烯酰胺类化合物指的是取代的丙烯酰胺与带有叠氮基团的丙烯酰胺混合物。
根据优选的实施方式,所述步骤1中在氨基聚苯乙烯微球的表面通过反应连接上第一活性基团,指的是氨基聚苯乙烯微球与4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)、溴-2-异丁酸N-羟基琥珀酰亚胺酯、丙烯酸发生反应连接上活性基团,或者与取代的4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)、取代的溴-2-异丁酸N-羟基琥珀酰亚胺酯、取代的丙烯酸发生反应连接上活性基团。
根据优选的实施方式,所述羰基α位置有卤素的基团为羰基α位置有溴的基团。
本发明有如下显著优点:
(1)微球可控性好,包括微球可反应性基团的调控、微球尺寸的调控、微球负载核酸量的调控。因为壳层聚合物链相比微球的整体尺寸占比较小,所以微球尺寸主要取决于使用的外购氨基PS微球,其尺寸有各种备选。
(2)微球的机械强度较高。因为核心是PS微球,故微球的机械强度比其他测序仪常用的聚丙烯酰胺类微球要高很多。
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