[发明专利]ALS类除草剂胁迫下棒头草稳定表达的内参基因、筛选方法及应用

权利要求书

1.一种ALS类除草剂胁迫下棒头草稳定表达的内参基因筛选方法，其特征在于，包括样品处理、提取RNA与制备cDNA、候选内参基因设计与分析，其中，候选内参基因设计与分析包括以下步骤：

（1）筛选5个候选内参基因，分别为UBQ、EF1、18srRNA、25srRNA、26srRNA，并设计上述候选内参基因的扩增引物；

（2）以所述cDNA作为扩增模板，利用PCR对所述扩增引物特异性进行测定；

（3）利用荧光定量PCR反应后得到的Ct值，对所述候选内参基因进行稳定性分析；

（4）利用Bestkeeper、NormFinder、geNorm分别计算分析所述内参基因在ALS类除草剂处理下的表达量稳定性。

2.根据权利要求1所述的一种ALS类除草剂胁迫下棒头草稳定表达的内参基因筛选方法，其特征在于，所述候选内参基因设计与分析的步骤（3）中荧光定量PCR反应体系包含：10μl iTaq universal SYBR Green Supermix (2x)、2μl cDNA 模板、上游或下游引物10μM各1μl、6μl 无菌超纯水；反应条件为：95°C预变性30s，95°C变性5s，60°C退火34s，40个循环。

3.根据权利要求1所述的一种ALS类除草剂胁迫下棒头草稳定表达的内参基因筛选方法，其特征在于，所述样品处理中的样品采集对象为：对ALS类除草剂表现3~4倍抗性水平的AR棒头草种群和对ALS类除草剂敏感的AS棒头草种群。

4.根据权利要求3所述的一种ALS类除草剂胁迫下棒头草稳定表达的内参基因筛选方法，其特征在于，所述样本处理包括：a.分别选择所述AR棒头草种群和AS棒头草种群两个种群中的种子进行分组播种，生长至3~4叶期后喷施浓度为4.0~5.0g.a.i/ha的ALS类除草剂；b.以喷施ALS类除草剂0h、24h、48h、72h为四次取样时间，取叶片并在液氮中速冻用于RNA提取。