[发明专利]基于CRISPR技术进行靶核酸多重检测的方法

权利要求书

1.一种检测样品中靶核酸的方法，所述方法为非疾病诊断目的的方法，所述方法包括将样品与核酸检测组合物和单链核酸检测器接触，所述核酸检测组合物包括Cas蛋白和gRNA；所述gRNA包括与所述Cas蛋白结合的区域和与靶核酸上的靶序列杂交的导向序列；其特征在于，所述方法包括将样品进行以下反应：

i、将样品与第一核酸检测组合物、第三核酸检测组合物和单链核酸检测器接触，在第一温度下反应第一时间段，然后在第三温度下再反应第三时间段；或者，

ii、将样品与第一核酸检测组合物、第三核酸检测组合物、第四核酸检测组合物和单链核酸检测器接触，在第一温度下反应第一时间段，之后在第三温度下再反应第三时间段，然后在第四温度下再反应第四时间段；

所述第一核酸检测组合物包括Cas12i、可以结合Cas12i以及与靶核酸上的第一靶序列杂交的第一gRNA；

所述第三核酸检测组合物包括Cas12j、可以结合Cas12j以及与靶核酸上的第三靶序列杂交的第三gRNA；

所述第四核酸检测组合物包括Cas12b、可以结合Cas12b以及与靶核酸上的第四靶序列杂交的第四gRNA；

所述第一温度为48℃；所述第三温度为52℃；所述第四温度为60℃；

检测由Cas蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号，从而检测靶核酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述可检测信号通过以下方式进行检测：基于视觉的检测，基于荧光信号的检测，基于传感器的检测，荧光偏振，胶体相变/分散，电化学检测和基于半导体的检测。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述可检测信号通过以下方式进行检测：颜色检测。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述可检测信号通过以下方式进行检测：基于金纳米颗粒的检测。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶核酸包括核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述靶核酸包括单链核酸、双链核酸。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述靶核酸包括单链 DNA、双链 DNA、单链RNA。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶核酸为病毒核酸、细菌核酸、与对照有差异的特异核酸。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述与对照有差异的特异核酸为特定的突变位点。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述病毒为植物病毒或动物病毒。

11.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述病毒为乳头瘤病毒，肝 DNA 病毒，疱疹病毒，腺病毒，痘病毒，细小病毒，冠状病毒。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述冠状病毒包括SARS、SARS-CoV2（COVID-19）、HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、Mers-Cov。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述单链核酸检测器的两端分别设置荧光基团和淬灭基团。

14.核酸检测组合物在制备检测样品中靶核酸的检测试剂盒中的用途；所述核酸检测组合物选自权利要求1中的第一核酸检测组合物和第三核酸检测组合物，或者，所述核酸检测组合物选自权利要求1中的第一核酸检测组合物、第三核酸检测组合物和第四核酸检测组合物；所述第一核酸检测组合物在权利要求1中所述的第一温度下与所述样品进行接触，所述第三核酸检测组合物在权利要求1中所述的第三温度下与所述样品进行接触，所述第四核酸检测组合物在权利要求1中所述的第四温度下与所述样品进行接触。

15.根据权利要求14所述的用途，其特征在于，所述检测试剂盒为适于不同温度下对样品进行多重检测的试剂盒；所述试剂盒包括所述第一核酸检测组合物和第三核酸检测组合物，或者，所述试剂盒包括所述第一核酸检测组合物、第三核酸检测组合物和第四核酸检测组合物。