[发明专利]一种地诺前列酮的浓缩方法

说明书

本发明公开了一种地诺前列酮的浓缩方法，涉及生物制药技术领域，包括以下步骤：取地诺前列酮的酶促反应液依次经微滤、超滤处理，得超滤透过液；向超滤透过液中加入乙醇溶液，至超滤透过液中乙醇浓度为17‑22％，然后进行纳滤处理，得纳滤浓缩液；将纳滤浓缩液进行过柱、一次旋蒸、萃取、二次旋蒸、复溶处理，得地诺前列酮的浓缩液。本发明采用纳滤对酶促反应液中的地诺前列酮进行浓缩处理提高其浓度，减小后续层析纯化处理的体积，提高纯化速率，且向超滤透过液中加入乙醇调节料液浓度，在不影响纳滤膜性能的基础上，有效提高纳滤浓缩的倍数，快速高效。

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，尤其涉及一种地诺前列酮的浓缩方法。

背景技术

地诺前列酮又称前列腺素E2，是一种重要的细胞生长和调节因子，是花生四烯酸环氧合酶代谢产物，为二十碳不饱和脂肪酸。前列腺素E2具有扩张血管、增加器官血流量、降低血管外周阻力、降低血压，使支气管平滑肌舒张、降低通气阻力，抑制胃酸分泌等作用，同时具有免疫抑制和抗炎作用。

目前，地诺前列酮常通过化学合成方法制得。酶催化法制备地诺前列酮的方法较少。CN201911326101.7的申请文件中提到酶催化法制备前列腺素E2得到反应液，但是利用该酶促反应液制备高浓度的前列腺素E2浓缩液还没有简单有效的方法，采用常规方法在浓缩过程中前列腺素E2易析出。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种地诺前列酮的浓缩方法，通过向料液中加入乙醇调节料液浓度，在不影响纳滤膜性能的基础上，有效提高纳滤浓缩的倍数，快速高效。

本发明提出的一种地诺前列酮的浓缩方法，包括以下步骤：

S1、取地诺前列酮的酶促反应液依次经微滤、超滤处理，得超滤透过液；

S2、向超滤透过液中加入乙醇溶液，至超滤透过液中乙醇浓度为17-22％，然后进行纳滤处理，得纳滤浓缩液；

S3、将纳滤浓缩液进行过柱、一次旋蒸、萃取、二次旋蒸、复溶处理，得地诺前列酮的浓缩液。

上述“地诺前列酮的酶促反应液”是指申请号为CN201911326101.7的申请文件中实施例5获得的反应液。

优选地，采用陶瓷膜微滤处理；优选地，陶瓷膜的孔径为100-500nm。

优选地，采用中空纤维超滤膜进行超滤处理；优选地，中空纤维超滤膜的截留分子量为5000Da。

优选地，采用纳滤膜进行纳滤处理；优选地，纳滤膜的截留分子量为150Da。

优选地，纳滤处理的压力为0.5-0.8MPa。

优选地，一次旋蒸和二次旋蒸的工艺条件为：压力为14-18mbar，转速27-32rpm，温度25-30℃。

优选地，萃取试剂采用乙酸乙酯。

有益效果：由于酶促反应液原料中的油脂会吸附在纳滤膜上堵塞孔道而无法采用纳滤膜过滤浓缩，本发明通过向料液中加入乙醇并摸索出合适用量，使其能够采用纳滤对酶促反应液中的地诺前列酮进行浓缩处理提高其浓度，减小后续层析纯化处理的体积，提高纯化速率，且向超滤透过液中加入乙醇调节料液浓度，在不影响纳滤膜性能的基础上，有效提高纳滤浓缩的倍数，快速高效，有效解决了未添加乙醇的料液纳滤浓缩至地诺前列酮1.2mg/ml时就出现样品析出、浓缩倍数低的问题。

附图说明

图1为本发明对比例中的超滤透过液经稀释2倍后的高效液相色谱图；

图2为本发明对比例中的纳滤浓缩液经稀释5倍后的高效液相色谱图；

图3为本发明实施例1中超滤透过液的高效液相色谱图；