[发明专利]基于SCAC-RI的液相色谱保留时间数据库校正方法

权利要求书

1.一种基于SCAC-RI的液相色谱保留时间数据库校正方法，其特征在于，首先利用化合物标准品在液相色谱-四极杆飞行时间质谱上在某一相同色谱条件下建立初始保留时间数据库，随后以直链酰基肉碱SCACs为基准指标产生保留指数，最后借助保留指数产生更新色谱条件下的保留时间数据库，直接用于新色谱条件的化合物鉴定；所述直链酰基肉碱SCACs为一类含有不同链长C0～C30脂肪酸结构通过酯键连接到肉碱的一系列同系物，包括生物样品中的内源性直链酰基肉碱、外部添加的直链酰基肉碱标准品或直链酰基肉碱稳定同位素标准品；具体步骤为：

步骤1、建立初始化合物保留时间数据库

具体流程如下：首先利用化合物纯物质配置合适浓度的单一标准品样品或混合标准品样本，需保证标准品样本浓度在质谱中响应良好，且同一混合标准品样本中不存在同分异构体干扰化合物指认；随后建立一个梯度洗脱色谱方法，色谱梯度覆盖各有机相比例；在该色谱条件下对各标准品样品进行分析，并记录下SCACs及其他各化合物的保留时间，建立初始数据库；

步骤2、根据直链酰基肉碱计算化合物保留指数

将化合物保留时间数据库中SCACs系列同系物作为校正指标，人为规定脂酰肉碱碳链碳原子个数×100作为保留指数，则其余各代谢物的保留指数按式(1)计算得到：

RI_T＝RI_m+(RI_n﹣RI_m)×(RT_T﹣RT_m)/(RT_n﹣RT_m) (1)

其中，RT_m、RT_T、RT_n分别代表某个待测目标代谢物T及其流出顺序相邻前后两个SCACm和n的保留时间，RT_mRT_TRT_n；RI_m、RI_T、RI_n分别代表对应待测目标代谢物T及其流出顺序相邻前后两个SCACm和n的保留指数；

步骤3、以SCAC作为指标，建立校正保留时间数据库

当液相方法在仪器间移植或进行方法微调时，首先直接测定生物样本或SCAC混合标准品，根据各SCAC的精确相对分子质量及其特征二级离子碎片[C₄H₅O₂]⁺来准确识别SCACs，进而确定SCACs的保留时间；随后根据式(2)计算初始数据库中所有化合物的校正保留时间：

RT_T＝RT_m+(RT_n-RT_m)×(RI_T-RI_m)/(RI_n-RI_m) (2)

其中，RT_m、RT_T、RT_n分别代表初始数据库中某个目标代谢物T及其流出顺序相邻前后两个SCACm和n的保留时间，RT_mRT_TRT_n，RI_m、RI_T、RI_n分别代表对应目标代谢物T及其流出顺序相邻前后两个SCACm和n的保留指数；

步骤(2)中保留指数RI覆盖范围的上限由最长碳链SCAC决定，通过购买超长链SCAC标准品或通过合成手段获得更长碳链长度SCAC的保留时间信息，以建立更宽的RI覆盖范围的初始数据库；对于最长碳链SCAC也无法覆盖到的色谱保留时间范围，采用式(3)所示的方法延拓，该方法利用保留时间最靠后的k个SCACs的保留时间增量与保留指数进行线性拟合，其中RT_m、RT_n分别代表相邻前后两个SCACm和n的保留时间，RT_mRT_n，RI_n代表SCACn的保留指数，a与b分别代表方程的斜率和截距；最终末端虚拟指数的保留时间利用式(4)所示方法进行不断延长，直至SCAC保留时间增量≤0时，RI延长终止；

RT_n-RT_m＝a×RI_n+b (3)

RT_V＝a×RI_V+b+RT_V-1 (4)

虚拟指数预测结果极大程度上取决于k值选取的多少，在多次尝试后选择使用保留时间增量与保留指数线性拟合结果的校正R²值最高时所对应的k值作为最优拟合点数个数。