[发明专利]一种诊断用生物标志物的应用

说明书

本发明提供一种多囊卵巢综合征诊断用miRNA生物标志物，所述miRNA生物标志物为miR‑615‑5p。本发明检测PCOS病人和健康对照的壁层颗粒细胞、卵丘颗粒细胞和血清中miR‑615‑5p的表达，发现miR‑615‑5p水平显著降低。在人原代颗粒细胞和人卵巢颗粒细胞系KGN中过表达miR‑615‑5p促进颗粒细胞增殖和雌激素的产生。采用DHT（双氢睾酮）诱导小鼠多囊卵巢综合征小鼠模型，发现miR‑615‑5p在多囊卵巢综合征模型小鼠卵巢中低表达。本研究表明，miR‑615‑5p可以作为多囊卵巢综合征的生物标志物，为临床制药提供理论基础。

技术领域

本发明涉及分子生物学和疾病基因研究和诊断领域。具体的，本发明涉及多囊卵巢综合征(PCOS)的microRNA生物标记物，以及所述microRNA在制备用于诊断或检测多囊卵巢综合征的试剂盒或基因芯片的应用。

背景技术

多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)影响6-8％的生殖年龄妇女，是最常见的内分泌疾病之一。该疾病最常见的临床表现是女性出现高雄激素血症，导致月经紊乱、稀少、闭经或不规则阴道出血、不孕、肥胖、多毛、子宫内膜过度增生及恶性变化、以及双侧或单侧卵巢呈多囊性改变并多伴有肥胖表型；在糖脂内分泌代谢方面出现胰岛素抵抗，继而引发糖尿病等并发症，远期并发症还包括心血管疾病和子宫内膜癌等。PCOS的临床表现存在异质性，在基础研究方面该病的相关机制研究一直是热点和难点。因此，进一步了解PCOS病理生理学的分子机制可能有助于鉴定新的诊断和治疗靶点。

miRNA是内源性长度约为21-25nt的非编码小RNA，对靶基因mRNA的降解和抑制起重要调控作用。miRNA作为潜在的组织特异性疾病的生物标志物，可为许多病理诊断提供有效措施。miRNA的异常表达与一些代谢紊乱(包括肥胖，糖尿病和PCOS等)有关，并且几项研究突出发现了miRNAs维持代谢体内平衡的功能。因此，miRNA是代谢过程的潜在调节因子，并且是调节PCOS和相关疾病相关复杂途径的有希望的靶标。

发明内容

本发明提供了表明多囊卵巢综合征(PCOS)的miRNA生物标记物。本发明提供了通过在样品，特别是颗粒细胞样品中检测所述生物标记物的miRNA的表达水平变化来检测或诊断PCOS的方法以及用于这些方法的试剂盒或基因芯片。

本发明提供的多囊卵巢综合征诊断用miRNA生物标志物，所述miRNA生物标志物为miR-615-5p。其成熟序列为：GGGGGUCCCCGGUGCUCGGAUC。

本发明还提供miR-615-5p在制备或筛选人多囊卵巢综合征的诊断及治疗药物中的应用。

本发明还提供miR-615-5p在制备人多囊卵巢综合征检测试剂中的应用。所述检测试剂选自用于southern印迹法、northern印迹法、PCR法、逆转录酶PCR法、实时定量PCR法、纳米阵列法、宏阵列法、放射自显影法或原位杂交法等方法检测生物标志物miR-615-5p的相关试剂。

本发明进一步提供一种多囊卵巢综合征诊断用试剂盒，所述试剂盒包括一种或多种特异性检测miR-615-5p表达水平的引物和/或探针。

所述引物是基于实时定量PCR法检测miR-615-5p而设计的，所述引物序列如下：

miR-615-5p-RT:5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTGCACTGGATACGACCATCCGA-3’

miR-615-5p-F:5’-TGCACGGGGGTCCCCGGTGCTCG-3’

miR-615-5p-R:5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTC-3’