[发明专利]诱导毁灭炭疽菌产孢培养基、制备方法及诱导产孢的方法

说明书

本发明公开了一种诱导毁灭炭疽菌产孢培养基，1L培养基包括莜麦60‑80g、葡萄糖20‑30g、牛肉浸膏10‑15g、琼脂15‑20g、红心莲多肉叶片80‑100g和水1L；制备过程包括：称取、过滤、混合、灭菌；诱导过程包括：菌株活化、菌丝体培养、分生孢子培养和分生孢子附着孢诱导。

技术领域

本发明涉及植物病原真菌研究技术领域，更具体地说是涉及一种诱导炭疽杆菌产孢培养基及诱导产孢的方法。

背景技术

毁灭炭疽菌(Colletotrichum destructivum)寄主范围十分广泛，可侵染烟草、向日葵、印度豇豆、紫花苜蓿、多肉和红掌等多种寄主植物，是国内多肉种植过程中主要的叶片病害。毁灭炭疽菌主要以分生孢子盘、菌丝体或分生孢子形式在病残组织或土壤中越冬，翌年初借气流传播到植株上。越冬后的菌丝体和分生孢子盘可发育成分生孢子成为初侵染源。此外，炭疽菌的流行与温、湿度两因素关系最为密切，通常以95％的高湿环境及24℃的温度发病最为严重。

目前防治该病害主要以化学药剂预防为主，科学合理的品种布局、减少初侵染源、抗性品种筛选等综合技术措施为辅。而在病菌致病性测定、防治药剂筛选及品种抗病性鉴定等试验中需要大量人工培养的分生孢子盘、分生孢子附着孢作为研究试验材料，快速获得大量分生孢子盘、分生孢子附着孢对研究试验起到很大作用，也决定了试验的成败与否。

现有技术常采用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基进行毁灭炭疽菌产孢培养，但其分生孢子盘、分生孢子附着孢生成量少，且获得大量分生孢子所需时间为10-15d，无法在短时间内满足人工对毁灭炭疽菌研究的需要。

因此，如何提供一种诱导毁灭炭疽菌产附着孢及分生孢子盘的培养基及方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种诱导毁灭炭疽菌产附着孢及分生孢子盘的培养基、制备方法和诱导方法，该培养基可提高毁灭炭疽菌的单位产孢量和附着孢形成率。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种诱导毁灭炭疽菌产孢培养基，1L培养基中包括下述质量分数的组分：

作为本发明优选的技术方案，1L培养基中包括下述质量分数的组分：

以上技术方案达到的技术效果是：本发明公开的培养基成分简单，易取材，操作性强，以葡萄糖为碳源，牛肉浸膏为氮源，此外加入生长因子-莜麦，其中富含的维生素可促进微生物代谢；加入多肉叶片对毁灭炭疽菌产孢能力具有一定的促进作用。

一种诱导毁灭炭疽菌产孢培养基的制备方法，包括下述步骤:

1)称量：按照质量称取莜麦、葡萄糖、牛肉浸膏、琼脂、红心莲多肉叶片和水，备用；

2)研磨、过滤：取多肉叶片，并用研磨成匀浆，过滤，取滤液；

3)将步骤2)所得滤液与步骤1)所得莜麦、葡萄糖、牛肉浸膏和琼脂混合，加水溶解，得溶液；

4)将步骤3)所得溶液在115-125℃下灭菌20-30min，冷却至45-55℃，每升培养基添加100μL浓度为50μg/mL的利福平，混合均匀，倒入培养皿中凝固，制得产孢培养基，备用。

以上技术方案达到的技术效果是：将各种组分混合后，灭菌，可去除组分中的微生物，防止在后期培养时，毁灭炭疽菌受到杂菌污染。

一种诱导毁灭炭疽菌产孢的方法，以上述制备得到的产孢培养基进行诱导，包括下述步骤：

1)菌株活化：将分离得到的毁灭炭疽菌菌株接种到PDA培养基平板上，置于25-30℃恒温培养箱中光照培养2-3d，得活化菌株；