[发明专利]一种砂仁高效再生体系建立的方法

说明书

本发明公开了一种砂仁高效再生体系建立的方法，该方法包括采种母本选择与处理；无菌芽制备、单芽诱导、丛生芽诱导、丛生芽增殖、壮苗培养、生根培养、生根苗炼苗和生根苗移栽。本发明工艺流程设计合理，瓶苗生长整齐健壮，增殖倍率高且稳定，生根苗移栽成活率高，苗木定植后生长良好，实现了砂仁离体高效再生，适用于砂仁商业化育苗生产，具备良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种基于离体培养技术的砂仁高效再生体系建立方法，属于作物栽培与生理生化领域。

背景技术

砂仁(Amomum villosum Lour)，又名小豆蔻，为姜科豆蔻属多年生草本植物。砂仁为传统南药，以干燥果实供药用，主治脾胃气滞，宿食不消，腹痛痞胀，噎膈呕吐，寒泻冷痢；砂仁气香浓郁，味辛辣，亦是提味增鲜的调料。主要分布于福建、广东、广西和云南，其中以广东阳春的品质最佳。砂仁为半阴生植物，生长适宜郁闭度为30%～50%，可在橡胶林、油茶林及其他林木下种植，在保证林农经济利益前提下，有效缩短非投产期，具备良好的推广应用前景。

砂仁种苗繁殖通常采用种子繁殖和分株繁殖的方式。异花授粉植物实生苗性状分离严重，个体差异大；分株繁殖虽然能保持母本优良性状，但繁殖系数极低，不能在短时间内繁殖出大量种苗，满足不了种苗市场需求。砂仁高效离体再生体系，以砂仁优良母本匍匐茎顶芽为原始材料，通过诱导丛生芽增殖成苗，将优良单株无性系化，有效保证了苗木的遗传稳定性，每月增殖倍数可达3.0～3.5倍，有利于砂仁良种苗木稳定生产和集约化经营。

发明内容

本发明的目的是提供一种砂仁高效再生体系建立的方法，该方法可实现砂仁优势单株无性系化、良种苗木稳定快速繁殖。

本发明提供的一种砂仁高效再生体系建立的方法，该方法包括以下步骤：

1）采种母本选择与处理：采种母本来源于砂仁良种种质资源圃，于8～9月砂仁果实成熟期，选择生长健壮结果良好的单丛植株，标记为采种母本；标记植株采果后松土并施用有机肥0.8～1.2公斤/丛，施肥后培土，培土后使用0.2%尿素+0.1%多菌灵水溶液按5L/丛用量浇灌，每10天浇灌1次，共3次，促进匍匐茎大量发生。

2）无菌芽制备：连续晴天3天以上即可采芽，于晴天正午剪取采种母本匍匐茎顶芽，长度4～5cm，保留1个节位，在距离节位1cm处剪断，节位根系保留1～2mm多余剪断；将采集的芽置于饱和漂白粉溶液中浸泡25～35min，无菌水漂洗2次，转移至0.1%升汞溶液处理15～25min，使用无菌水漂洗4次以上，将漂洗干净的芽进行切割，切除原切口接触升汞溶液的部分，将根系切除，接种到空白MS培养基；该培养基附加蔗糖30g/L、卡拉胶6g/L，灭菌前pH调节为5.8，灭菌温度121℃、压力1.1 kg/cm²、灭菌时间20min，培养环境为温度27℃±1℃，光照1500～2000lx，光照时间为12h/d；后续培养基未加以说明的培养基中卡拉胶用量、pH调节、灭菌方法均与步骤2）相同，未加以说明的培养环境均与步骤2）相同。

3）单芽诱导：步骤2）获得的离体顶芽经过10～15d培养，剔除污染，接种到单芽诱导培养基培养，培养30d后，单芽拔节长高成苗，叶片展开，基部节位侧芽萌动，在无菌条件下，切除叶片，将苗分为带2～3个节的茎段，重新接入单芽诱导培养基，培养时间30d；

4）丛生芽的诱导：将步骤3）获得的侧芽形成单芽的茎段取出，分割为带一个侧芽的茎段，接种至丛生芽诱导培养基；接种30d后，原接种单芽膨大且基部着生少量不定芽，将其纵切为带一半原单芽及部分不定芽的组织块，转移至相同培养基，继续培养30d形成密集矮缩的丛生芽；