[发明专利]一种猫N-端脑利钠肽前体蛋白的单克隆抗体及制备和应用

说明书

本发明公布了一种猫N‑端脑利钠肽前体蛋白抗体，所述抗体用含猫N‑端脑利钠肽前体蛋白的氨基酸多肽做抗原免疫小鼠获得；并提供了一种猫N‑端脑利钠肽前体蛋白抗体的制备方法，主要包括猫N‑端脑利钠肽前体蛋白片段的合成和猫N‑端脑利钠肽前体蛋白片段的抗体的制备。制备方法简单易于实现，所制备的抗体可以快速识别猫N‑端脑利钠肽前体蛋白，且特异性高、效价高、灵敏度高；将抗体应用于制备检测试纸条，使用时间分辨免疫荧光定量方法进行定量检测，同时可提高检测的灵敏度和检测结果的准确性，本发明以创新性的技术改进，取得了突出的技术效果，同时成本低、设备要求低、可操作性强、具有良好的社会推广应用价值。

技术领域

本发明涉及生物免疫抗体及检测领域，尤其涉及一种猫N-端脑利钠肽前体蛋白的单克隆抗体及制备和应用。

背景技术

根据对宠物市场的监测数据显示，截至2019年1月底，2018年中国养宠用户达到9978万户，比例攀升至22％，2018年宠物猫数量为6700万只。中国宠物市场规模进一步扩容至1722亿元，其中宠物猫的市场规模则在602亿元左右。从细分市场的规模来看，602亿元的宠物猫市场中医疗服务市场、宠物猫用品、服务和活体销售的规模位居第二，均在85亿元左右。

猫心脏病是临床很常见的一种疾病，可多年发病而不表现任何临床症状给临床诊断上带来困难，对于猫心脏病的诊断，我国小动物临床上一般使用X线拍摄、心电图、心动超声图等进行诊断，心脏病的实验室检查在我国宠物心脏病的诊断上应用非常少。N末端签B型利尿钠肽(NTproBNP)作为人多种类型的心肌病和全身疾病中已经报道了生物标记物的测量。

NT-proBNP是BNP激素原(proBNP)分裂后无活性的N末端片段，由108个氨基酸构成的多肽，主要在心肌细胞受新容量负荷和压力负荷增高时由左心室分泌，以应对心肌上的拉伸或应变，然后被裂解为具有生物活性的BNP和NT-proBNP。一旦proBNP从心肌细胞释放，被切割成2部分，活性C末端BNP和无活性NT-proBNP。NT-proBNP与脑利钠肽(BNP)相比，其半衰期更长、更稳定，操作的重复性好，检测早期和(或)轻度心力衰竭时的敏感度更高。由于NT-proBNP可反映短暂时间内新合成的而不是贮存的BNP的释放，因此更能反映BNP通路的激活。生理状态下，心室、心房分泌少量BNP，因此健康血液循环中仅有低浓度BNP。病理状态下，如心室负荷及室壁张力增加时，引起心室尤其是左心室BNP大量分泌。近年来BNP、NT-proBNP在心力衰竭诊断、呼吸困难的鉴别诊断、心力衰竭疗效评价及心力衰竭患者预后评估方面日益受到关注。在心功能受损时，NT-proBNP增高的比例及绝对值均超过BNP，因此，作为早期心功能损害的标志，NT-proBNP可能更为敏感。血清或血浆中的脑利钠肽前体(NT-proBNP)可作为疑诊为心力衰竭个体的辅助诊断工具，NT-proBNP是评价心功能的敏感指标，是反映心衰的一个重要指标，在临床上主要用来检测是否合并心衰及心衰的严重程度，并且脑利钠肽前体在急性心衰时反映较灵敏，是急性心衰检查中最具有敏感性的指标，可以早期发现心衰症状。

NTproBNP是犬猫临床上最常用于心脏病实验室检查的生物标记物，NT-proBNP有助于诊断充血性心力衰竭，筛查潜在性疾病及心脏病的治疗和预后。而作为猫NTproBNP的抗体在市面上尚未有商品化的产品在售。

现有的诊断工具使用起来都较为繁琐，需要专业的仪器和专业的检测人员，检测成本高，且需要较苛刻的实验条件，因此对于其推广应用存在一定的局限性

最近几年，时间分辨免疫荧光定量检测技术正处于快速发展阶段。使用NT-proBNP抗体进行标记建立猫心脏病筛查的时间分辨免疫荧光定量方法，现有市场上还尚未有开发成功的先例。近年来针对特定病原微生物的检测试剂盒得到了广泛的应用，多数基于抗原抗体反应，再配合荧光信号检测仪器，因此检测较快且结果判别容易。而时间分辨免疫荧光定量检测技术的质量很大程度上由抗体性能所决定，一种敏感性强、结合速度快的抗体将有助于提升检测的准确性和检测速度。