[发明专利]一种Siamenoside I的生物合成方法

权利要求书

1.一种Siamenoside I的制备方法，其特征在于利用糖苷水解酶选择性水解罗汉果苷V制备罗汉果苷IIIE，使用UDP-葡萄糖依赖糖基转移酶及其突变体定点糖基化修饰罗汉果苷IIIE，合成Siamenoside I。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述糖苷水解酶为来源自酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae的Exg1，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；或所述糖苷水解酶为来源自黑曲霉Aspergillus niger的Asn，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述UDP-葡萄糖依赖糖基转移酶来源自罗汉果Siraitia grosvenorii的糖基转移酶UGT94-289-2，氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；

或所述UDP-葡萄糖依赖糖基转移酶为UDP-葡萄糖依赖糖基转移酶突变体：UGT94-289-2氨基酸序列中W16、K53、L93、M94、L97、I124、L125、T146、M150、T154、T181、T182、I194、E195、E275、S308的单点或多点突变体。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于UDP-葡萄糖依赖糖基转移酶突变体：

5.根据权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于构建工程菌重组表达糖苷水解酶、UDP-葡萄糖依赖糖基转移酶及其突变体以制备Siamenoside I，所述的菌株为乳酸菌、链霉菌、酵母菌或枯草芽孢杆菌。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于糖苷水解酶和UDP-葡萄糖依赖糖基转移酶可共表达于同一菌株，或分别独立表达于不同菌株。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的方法，其特征在于向反应体系加入外源性活性糖供体UDP-葡萄糖；或由蔗糖-蔗糖合成酶-UDP-葡萄糖再生循环系统产生UDP-葡萄糖；或由细菌内源性UDP-葡萄糖合成途径产生UDP-葡萄糖；或设计改造后的UDP-葡萄糖合成途径产生UDP-葡萄糖。

8.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于用含糖苷水解酶和UDP-葡萄糖依赖糖基转移酶的细胞提取液构建反应体系；或用含糖苷水解酶和UDP-葡萄糖依赖糖基转移酶的菌体构建原位或静息细胞反应体系。