[发明专利]基于整体斑马鱼模型体内脂质三维质谱成像的方法

权利要求书

1.基于斑马鱼模型体内脂质三维质谱成像的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：取C1型尼曼匹克纯合子的斑马鱼和野生型的斑马鱼，包埋后，分别获得NPC1^-/-组和WT组的冰冻组织切片，基质沉积后采集MALDI质谱成像数据；

步骤2：经SCiLS处理，调节x、y轴使所述冰冻组织切片能够按照生物原始形貌准确堆叠:

步骤3：对比NPC1^-/-组和WT组的冰冻组织切片检测到的质荷比m/z的三维成像结果，获得具有空间分布差异的m/z值；并采集其MALDI二级碎片信息；

步骤4：搜索脂质组学质谱数据库，结合所述MALDI二级碎片信息，获得所述空间分布差异的m/z值所对应的脂质。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中所述包埋包括：取C1型尼曼匹克纯合子的斑马鱼和野生型的斑马鱼用包埋剂将整条斑马鱼包埋，置于-80℃凝固；于-20℃每隔56μm取一片厚度为14μm的冰冻组织切片样本粘附于ITO板，确保所取冰冻组织切片包括斑马鱼的所有完整器官组织；NPC1^-/-组和WT组分别取至少20片所述冰冻组织切片。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述包埋剂包括10％羧甲基纤维素钠和10％明胶的混合物。

4.如权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，步骤1中所述基质沉积采用的基质为浓度为7mg/mL的N-(1-萘基)乙二胺二盐酸盐和50％甲醇。

5.如权利要求1至4任一项所述的方法，其特征在于，步骤1中所述基质沉积的条件包括：喷雾功率的35％；调制为20％；沉积时间为1.0s；孵育时间为15s；干燥时间为60s。

6.如权利要求1至5任一项所述的方法，其特征在于，步骤1中所述MALDI质谱成像的采样条件包括：质量检测范围为400-1000Da；检测电压为3.0×2810V；空间分辨率为50um；离子源使用脉冲式激光，激光能量为70％；离子模式为负离子射模式，离子类型为[M-H]^-。

7.如权利要求1至6任一项所述的方法，其特征在于，步骤4中所述搜索的条件包括：分子量偏差为±0.1Da，负离子模式选择的离子类型为[M-H]^-。

8.如权利要求1至7任一项所述的方法，其特征在于，所述分布差异存在于脑、眼、脊柱、心脏和肠道。