[发明专利]一种快速鉴别牛猪鸡鸭动物源成分的多重PCR引物组及其方法和试剂盒

说明书

本发明公开了一种快速鉴别牛猪鸡鸭动物源成分的多重PCR引物组及其方法和试剂盒。所述多重PCR引物组包括4对引物：牛源性成分检测引物对B‑F/R、猪源性成分检测引物对P‑F/R、鸡源性成分检测引物对C‑F/R和鸭源性成分检测引物对D‑F/R，其引物序列依次如SEQ ID NO:1～8所示。所述引物对仅对各自物种的目标片段进行特异性扩增，不会对其他物种进行非特异性扩增，检测时间短，其对牛肉制品中掺杂的猪、鸡、鸭源性成分检测限可达0.1％(w/w)，适用于多种肉类加工产品中动物源成分鉴别检验，适用范围广、可靠性高。

技术领域

本发明涉及肉及肉类产制品中动物源性成分鉴定的食品检验技术，更具体地，涉及一种快速鉴别牛猪鸡鸭动物源成分的多重PCR引物组及其方法和试剂盒。

背景技术

受经济利益驱使，肉制品掺假一直是食品安全中屡禁不止的重要问题。2013年欧洲各国爆发了震惊全球的“马肉风波”事件，此事件引起了全球对于肉制品掺假的关注。因为不同肉类存在价格差异，一些不法商家为了达到追求高利润的目的，利用廉价肉类相似的形态、颜色等相仿特征，并加以人工处理，对高值肉类进行掺杂使假，严重干扰了全球范围内的肉业生产。这也成为制约肉品质量提升的主要因素，而且严重损害了消费者的经济利益和知情权，甚至涉及宗教信仰等问题(例如在清真食品中掺杂进猪肉等)。

在利益驱动下，有些不法商贩和企业用价格低的其它禽畜肉为原料，通过人为加工处理后，冒充和掺假牛肉进行售卖，从中牟取暴利，这使得牛肉制品掺假问题严重。同时由于猪肉、鸭肉等其肉质肌纤维纹路与牛肉较为接近，将其混合掺杂进牛肉制品中，再通过添加剂等成分加工成成品后更是难以分辨，常能以假乱真。同时，随着掺假手段越来越复杂，传统的感官分辨方法已经不能满足肉质品种鉴别的检测要求。近年来，国内外学者基于各类技术手段开展了肉制品中动物种类的定性检测方法的研究，主要分为形态学方法、基于代谢物的检测方法以及基于核酸和蛋白的检测方法。基于DNA的分子生物学检测方法因其具有灵敏度高、特异性强、检测时间短、成本低等优点，已成为肉类成分鉴别技术的研究热点。在所有动物源性成分的检测技术中，目前主要存在PCR-RFLP分析、PCR-RAPD分析、核酸探针杂交、PCR等检测技术。PCR技术是发展较为完善、灵敏度及准确度都相对较好的一种技术手段，在国内外已得到广泛应用。其他方法由于操作难度大或检测成本高等缺点，在实际检测中应用较少。

目前国内出台的动物源性相关检测标准主要集中在常规PCR和实时荧光PCR技术，大多数标准检测方法只能进行单一动物物种的鉴别。在肉类食品样本实际检测过程中，对于深度加工、成分不明确的肉类制品，需要通过多次检测才能确定，这就增加了样品检测周期、加大了检测工作量，同时因为需要昂贵的仪器及配套试剂耗材，导致检测成本过高，因此很难在低资源的肉制品检测一线进行推广应用。现有技术中也有一些关于多种动物源性相关检测的PCR检测方法，例如专利CN104673900A和CN104894263A均采用了多重RT-PCR的熔解曲线分析技术来达到肉与肉制品中多种源性成分的快速鉴别，但该方法仅通过熔解曲线温度tm值范围不能区分如狐狸、貉子等同科动物同源性很近的物种，另外该方法对设计的引物要求很强的特异性，多对引物容易引起交叉反应和非特异性扩增；专利CN106148559A公开了一种同步检测五种动物源性成分的多重PCR引物体系及检测方法，虽然可以实现一次性检测牛、猪、羊、鸡、鸭5个动物物种，但是其扩增片段较长，仅能以样品DNA为模板进行扩增，因此检测时间较长，检测的肉类食品种类有限，且检测限依然有待提高。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种快速检测牛、猪、鸡、鸭四种动物源成分的多重PCR引物组。

本发明的第二个目的在于提供所述多重PCR引物组的应用。

本发明的第三个目的在于提供一种快速鉴别肉类制品中牛猪鸡鸭动物源成分的多重PCR检测方法。

本发明的第四个目的在于提供一种快速鉴别肉类制品中牛猪鸡鸭动物源成分的试剂盒。