[发明专利]抗体活性改造及其筛选方法有效

申请号：	202010997819.5	申请日：	2020-09-21
公开（公告）号：	CN112592404B	公开（公告）日：	2023-07-25
发明（设计）人：	李福彬;赵英杰;刘小波;张燕;石欢;张慧慧	申请（专利权）人：	上海交通大学医学院
主分类号：	C07K16/28	分类号：	C07K16/28;G01N33/53;G01N33/533;G01N21/64
代理公司：	上海专利商标事务所有限公司 31100	代理人：	陶启长
地址：	200025 ***	国省代码：	上海;31
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摘要：
搜索关键词：	抗体活性改造及其筛选方法
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【权利要求书】：

1.一种上调抗体柔性或下调抗体的Fc受体依赖性激动活性的方法，包括突变CH1铰链区的上部和/或中部铰链结构域，所述突变选自以下一种或多种：

(a)在上部铰链结构域ERK的C端插入G、GS、GSGSG、GSGSGS、(GSGSGS)₂、(GSGSGS)₃，

(b)将上部铰链结构域VPRD变为EPRVPITQNP、中部铰链结构域CGCKPCICT变为CPPLKECPPCA，

(c)将上部和/或中部铰链结构域突变为IgG3或mIgG2a的相应区域，或将铰链区突变为IgG3或mIgG2a的铰链区，或将CH1-铰链区突变为IgG3或mIgG2a的CH1-铰链区，其中，上部铰链结构域的突变前序列选自以下一种或多种：EPKSCDKTHT、P、ERK、ESKYGPP、VPRD，中部铰链结构域的突变前序列选自以下一种或多种：CPPCP、CPVPPPPPCC、CCVECPPCP、CPSCP、CPVPPPPPCC、CGCKPCICT，并且，IgG3的上部铰链结构域为ELKTPLGDTTHT、中部铰链结构域为CPRCP(EPKSCDTPPPCPRCP)₃，mIgG2a的上部铰链结构域为EPRVPITQNP、中部铰链结构域为CPPLKECPPCA。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述抗体是激动型抗体，和/或

突变之后所述抗体的柔性大于或相当于IgG3，和/或

对所述抗体的突变不显著降低所述抗体对其特异性靶向的抗原的亲和力，和/或

突变后的所述抗体的回转半径(Rg)大于和/或

所述抗体为人抗体、嵌合抗体或者人源化抗体。

3.一种下调抗体柔性或上调抗体的Fc受体依赖性激动活性的方法，包括突变CH1铰链区的上部和/或中部铰链结构域，所述突变选自以下一种或多种：

(a)在上部铰链结构域ERK的C端插入GSG或GSGS，

(b)将上部铰链结构域EPKSCDKTHT变为P、中部铰链结构域CPPCP变为CPVPPPPPCC。

(c)将上部和/或中部铰链结构域突变为IgG1、IgG2或IgA2的相应区域，或将铰链区突变为IgG1、IgG2或IgA2的铰链区，或将CH1-铰链区突变为IgG1、IgG2或IgA2的CH1-铰链区，其中，上部铰链结构域的突变前序列选自以下一种或多种：ELKTPLGDTTHT、ESKYGPP、VPRD、EPRVPITQNP，中部铰链结构域的突变前序列选自以下一种或多种：CPRCP(EPKSCDTPPPCPRCP)3、CPSCP、CGCKPCICT、CPPLKECPPCA，并且所述IgG1的上部铰链结构域为EPKSCDKTHT、中部铰链结构域为CPPCP，IgG2的上部铰链结构域为ERK、中部铰链结构域为CCVECPPCP，IgA2的上部铰链结构域为P、中部铰链结构域为CPVPPPPPCC。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，

所述抗体是激动型抗体，和/或

突变之后所述抗体的柔性不超过人IgG1，和/或

对所述抗体的突变不显著降低所述抗体对其特异性靶向的抗原的亲和力，和/或

突变后的所述抗体的回转半径(Rg)为或者小于人IgG1的Rg，和/或

所述抗体为人抗体、嵌合抗体或者人源化抗体，和/或

所述抗体特异性识别TNF受体超家族中受体，和/或

所述抗体为抗CD40抗体或者抗DR5抗体。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，突变后的所述抗体的回转半径(Rg)为

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，还对所述重链恒定区中Fc段进行修饰，以提高所述激动型抗体和FcγRIIB的亲和力或者所述激动型抗体的I/A比值。

7.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法在免疫系统表达人Fc受体的条件下调节抗体柔性或调节抗体的Fc受体依赖性激动活性。

8.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述Fc受体是人Fc受体。